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双链DNA即目的基因
基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 操作过程 目的基因的检测与鉴定 目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 目的基因的获取 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 即:将需要的基因从供体生物细胞内提取出来 目前被广泛提取使用的目的基因有:苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因(抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。 获得目的基因的方法 1)从基因文库中获取目的基因 1.什么是基因文库? 2.怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因? 2) 2)利用PCR技术扩增目的基因 3)人工合成 种类: 基因组文库: cDNA文库: 含有一种生物的全部基因 含有一种生物的部分基因 根据基因的有关信息:如基因的转录产物mRNA 1.用一定的_________切割 质粒,使其出现一个切 口,露出____________。 2.用_____________切断目 的基因,使其产生_____ ____________。 —— 核心 3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处, 再加入适量___________,形成了一个重组 DNA分子(重组质粒) 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 (二)基因表达载体的构建 基因表达载体的构建——核心 质粒 DNA分子 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA 连接酶 重组DNA分子(重组质粒) 同一种 限制酶 目的基因与运载体的结合过程,实际上是不同来源的基因重组的过程。 科学家在培育抗虫棉时,经过了许多复杂的过程和不懈的努力,才获得成功。 起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中,然后导入棉花的受精卵中,结果抗虫基因在棉花体内没有表达。 然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端),导入棉花受精卵,长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端),导入棉花受精卵,结果成长的植株,有了抗虫能力。 资 料: 基因表达载体的组成: 目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用。 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因等 (三)将目的基因导入受体细胞 常用的受体细胞: 动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。 将目的基因导入受体细胞的原理: 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 转化—— 目的基因进入_________内,并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 方法 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 —— 感受态细胞吸收DNA分子 (三)将目的基因导入受体细胞 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测— 鉴定— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 DNA分子杂交 抗原-抗体杂交 PCR技术—聚合酶链式反应 原理: 前提: 条件: PCR扩增仪 DNA双链复制的基本原理 一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 热稳定DNA聚合酶(Taq酶) DNA的两条链为模板 温度控制 类别 项目 ? 复制 ? 转录 场所 特点 模板 原料 酶 能量 碱基 配对 产物 细胞核 只有DNA的一条链 四种核糖核苷酸 RNA聚合酶 ATP A-U C-G T-A G-C 细胞核 DNA的两条链 四种脱氧核苷酸 解旋酶、DNA聚合酶 ATP A-T C-G T-A G-C 两个双链DNA分子 一条单链mRNA 边解旋边复制, 半保留复制 边解旋边转录 5/ 3/ G—G T—C 3/ 5/ G—A C—C 5/ 3/ 引物Ⅱ G—G 变性 复性 延伸 1.目的基因DNA受热变性,解链; 2.引物与单链互补结合; 3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。 5/ 3/ A—G 引物Ⅰ 利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术扩增过程 a、DNA变性(90℃-95℃):双链DNA模板 在热作用下, 断裂,形成_______ b、复性(55℃-60℃):系统温度降低,引物 与DNA模板结合,形成局部________。 c、延伸(70℃-75℃):在Taq酶的作用下,从 引物的5′端→3
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