噬菌体抗体文库的构建及人源抗HIV.pdf

第 14 卷 第 1 期 中 国 生 物 化 学 与 分 子 生 物 学 报 V o l14,N o 1 1998 年 2 月 Ch inese Jou rnal of B iochem istry and M o lecu lar B io logy Feb. 1998　 噬菌体抗体文库的构建及人源抗H IV- 1 gp 160 抗体的筛选 1) 2) 1) 1) 赵云峰 　王海涛 　王全立 　杜芝燕 1) 1) 1) 3) 杨景庚 　孙红琰 　马立人 　殷　震 ( 1) 军事医学科学院放射医学研究所, 北京 100850; 2) 军事医学科学院微生物与流行病研究所, 北京 100071; 3) 中国人民解放军农牧大学, 长春 130062) 摘要　构建人源噬菌体抗体文库如下: H IV 感染者脾细胞中提取m RNA , 经反转录再以人 IgG 重链 Fd 两端及轻链“通用”引物分别扩增 Fab 基因片段, 依次插入到噬菌粒载体pCom b 3 中, 电转化大肠杆菌 1 , 经辅助噬菌体救助, 重组噬菌体得以溶源裂解, 表达于噬 XL B lue Fab 5 菌体包膜蛋白 的N 端. 此噬菌体抗体库的容量为 5 ×10 . 筛选抗H IV 1 同时又具有能被抗 独特型抗体“ 7 ”所识别的独特型的阳性抗体: 以重组包膜糖蛋白 160 及 41 多肽对噬菌 IF gp gp 体抗体文库进行三次淘选, 使抗 gp 160 的特异性抗体得到 100 倍的富集. 然后通过直接 和竞争性 实验筛选出两株结合性较好的特异性抗 160 抗体3 株与 1 株. EL ISA EL ISA gp B D 直接 EL ISA 实验表明这两株克隆均能被“1F 7 ”所识别, 为抗独特型多肽的筛选奠定了基础. 关键词: 噬菌体抗体, H IV , 独特型抗体 “1 7 ” - 160 Screen ing of F Id iotyp ic An ti gp An tibod ies from Phage An tibody L ibrary 1)