发酵染菌原因分析-资料.DOCVIP

发酵染菌原因分析 第一部分：基础知识 1）杂菌的类型 空气中的微生物大多数是细菌和芽,还有一定数量的霉菌、酵母和病毒。细菌的大小有零点几微米至几个微米这些微生物在空气中极少单独游离存在,基本上是附着于灰尘、液滴等微粒的表面上。介质过滤除菌就是把空气中的各种微粒和极少量的游离微生物捕集起来予以除掉。u可以保证无菌发酵生产的原因。 2）无菌检查与染菌的处理 过程中,为及发现染菌并进行恰当处理,保证行,对菌种制备、种子罐发酵罐的接种前后和培养过程中,须要按工艺规程要求按时取样，进行无菌检验。 A无菌检查 培养液是否污染杂菌可从三个方面进行分析a:无菌试验 b:培养液的显微镜拉查 c:培养液的生化指标变化情况。 其中无菌试验是判断染菌的主要依据。 无菌试验 现在采用的无菌方法有肉汤培养法、双碟培养法、斜面培养法以红肉汤培养法和双培养法合起来进行无菌检查用的较多。 (1)肉汤培养法用装有红肉汤的无菌试管取样,然后放入温室(箱内培养定时观察试管内肉汤培养基的颜色变化,同时进行显微镜观察。（2斜面培养法 先用空白无菌试管取样,然后在无菌条件下接斜培养基上,置于37温室(箱)内培养定时观察有无杂菌菌落生长。。 （3双碟培养法 种子罐样品先取入肉汤培养基中,然后在无茵条件下在双碟培养基上面划线,剩下的肉汤培养物在恒温室(箱内培养6小时后复划线一次,发酵罐培养液直接取入空白无菌试管中,于37下培养6小时后在双碟培养基上划线。24小时内的双碟定时在灯光下检查有无杂菌生长。24小时~48小时的双碟1天检查一次,以防生长缓慢的杂菌漏检常生产过程中,种子罐和发酵罐每隔8小时取样一次,进行无菌检查。无菌试验的结果一般需要8~12小时才能作出判断。为了缩短判断时间,有时向培养赤霉素对氨基苯甲酸等生长激素以促进杂菌的生长。 B:染菌的判断 培养基的染菌判断是错综复杂的工作,又是一种细微观察、认真分析的王作 染菌罐的判断以无试验中的红肉汤培养和双碟培养的反应为主,以镜检为辅。每个无菌样品的无至少用2只红肉汤同时取样培养。要定量或用接种取法取样酵罐直接取样。因取样量不同,影响颜色反应和浑浊程度的观察如果连续3红肉汤无菌样发生颜色变化或产生浑浊,或连续3个时样品长出杂菌染菌。有时红肉汤反应不明显,要结合镜检确认连续3个时样品染菌各级种子罐的染菌判断亦参照上规定。 对肉汤和无菌的观察及保存期的规定,发酵培养基灭菌后应取无菌样以后每隔时取无菌样一直至放罐无菌试验的肉汤和双碟应保存并观察至本罐批放罐后无菌污染后方可弃去。无菌检查时间应每6小时观察次无试验样，以便能及早2、染茵率的统计 以发酵罐染菌罐批(次为基准, 染菌罐批(次发酵(全周期染菌,均作染菌论处发酵罐染菌罐批(次) 染菌率(％)一一一一一一一一－－－X100% 总投罐批(次 3）染菌(包括染噬菌体)的处理 (一)污染杂菌的处理 发酵罐污染杂菌后,时间、所染杂菌的危害性及时进行处理,同对所涉及的设备也要及时处理。 a.种子罐染菌的处理 种子罐染菌后都不能往下道工序移种,要及时用高压蒸汽直接灭菌后放下水b.发酵染菌的处理 发酵罐前期染菌,污染的杂菌对产生菌的危害性,采用蒸汽灭菌后放掉;如果危害性不大,可用重新灭菌、重新接种的方式处理,如营养成分消耗较多,可放掉部分培养液补部分新培养基后进行灭菌,重新接种如污染的杂菌量少且生缓慢,可以继续运转下去,但要时刻注意杂菌数量和代谢的变化。在发酵的中后期染菌,一是加入适量的杀菌剂,如西林或某些抗生素,抑制杂菌的生长。二是降低培养温度或控制补料量来控制杂菌的生长速度如果采用上述两种措施仍不见效,就要考虑提前放罐。 c、染菌后的设备处理 ..染菌后的罐体用甲等化学物质处理,再用蒸汽灭菌〈包括各种附属设备。在再次投料之前,要彻底清洗罐体、附件,同时进行严密程度检查,以防渗漏。(二)污染噬菌体的处理 抗生素等产品发酵过程中有时出现噬菌体污染,轻者造成生产能力大幅度下降,重者造成停产。 一般噬菌体污染后往往出现发酵液突然转稀,泡沫增多,早期镜检发现菌体染色不均匀在较短时间内菌体大量自溶,最后仅残留菌丝断片,平皿培养出现典型的噬菌斑,溶氧浓度回升提前,营养成分很少消耗,产物合成停止等现象。发酵过程中污染噬菌体后一般做如下处理发酵液用高压蒸汽灭菌后放掉,严防发酵液任意流失全部停产,对环境进行全面的清洗和消,断绝噬菌体的寄生基础更换生产菌种,不断筛选抗噬菌体菌种,防止噬菌体的复污染。 污染烈性噬菌体时出现上述现象。如果污染温和噬菌体时,其反应温和,平皿培养不出现明显的噬菌斑,只出现部分菌体自溶,生化指标变化不显著,生产能力降低,对的危害亦是严重的,但不易被发现。防止温和噬菌体污染的方法同上所述。 染菌是发酵工业的大敌,不制服染菌就不能实现优质高产。分析染菌的原因是很困