产维生素K2黄杆菌复合诱变及发酵优化-中国组织工程研究.PDFVIP

第 33 卷 第 4 期 辐射研究与辐射工艺学报 J. Radiat. Res. Radiat. Process. Vol.33, No.4 2015 年 8 月 /fushe/CN/volumn/home.shtml August 2015 产维生素 K 2 黄杆菌复合诱变及发酵优化 檀 沐 赵根海 刘 会 李哲敏 孙小雯 郑之明 （中国科学院离子束生物工程学重点实验室 合肥 230031 ） + 摘要 利用亚硝基胍(NTG)和低能氮离子束(N )注入复合诱变方法，获得产维生素 K2 黄杆菌(Flavobacterium sp.)菌株，并对突变菌株发酵条件进行优化，进一步提高黄杆菌产维生素 K2 的能力。确定最佳诱变条件为： NTG 处理浓度 0.8 mg/mL，处理时间20 min ；N+离子注入能量 15 keV，80 (2.6×1013 cm2) ，突变菌维生素K2 产量为 6.12 mg/L，较原始菌株提高了 159%。突变菌传代6 次，维生素 K2 产量稳定。进一步优化突变菌发酵 条件，确定最优发酵条件为：温度 37 ℃、起始 pH=7.0 ，装液量 30 mL/250 mL，接种量 2% 、摇床转速 120 r/min ，发酵后 72 h 添加 3 mg/mL 花生衣(Arachis hypogaea)作为诱导物，优化后的菌株维生素 K2 产量较优化 前提高 31% 。 关键词 黄杆菌，亚硝基胍，氮离子注入，维生素 K2 中图分类号 TQ924, TL99, Q68 DOI: 10.11889.j.1000-3436.2015.rrj.33.040401 自然界中的维生素K 包括 VK1（Phylloquinone ， 外对微生物法产维生素 K2 的研究主要对象是大肠 叶绿醌）和 VK2 （Menaquinone ，甲萘醌类）两种 杆菌和纳豆芽孢杆菌[11-13]，对产维生素 K2 黄杆菌的 形式，VK1 主要由植物产生，VK2 主要由微生物产 研究甚少，在国内尚未见有课题组以黄杆菌为对象 生[1] 。VK2 是一类具有相同 2- 甲基-1,4-萘醌环不同 研究维生素 K2 的代谢。黄杆菌中，VK2 主要以 MK4 [2] 长度侧链的系列衍生物 ，由于异戊二烯侧链在C-3 和 MK6 两种形式存在。早期学者通过 NTG 和紫外 上的长度不同，VK2 可以分为 14 种，分别以 MK-n 诱变得到抗 1-羟基-2-萘甲酸、高产 MK6 的黄杆菌 表示（其中n 表示侧链异戊二烯单位数）。在细菌中， HNA 250-15 ，再通过松萝酸等物质的筛选，得到高 VK2 参与电子传递、氧化磷酸化等代谢途径。研究 产 MK4 和 MK6 的突变菌K3-15[14] 。田口久贵等[15] 表明，VK2 对人体凝血、骨骼代谢与心血管疾病治 以 K3-15 为亲株，进行磺胺类药物（对维生素 K2 疗有一定的功效[3-4] 。此外，其对肿瘤细胞的增殖具 合成途径中芳香族化合物的合成产生抑制作用）的 有一定的抑制作用[5] 。近期研究发现，作为电子载 抗性诱变，得到的诱变菌株 SP0736 产维生素 K2 的 体，VK2 还可能用于治疗线粒体类病理如帕金森症 能力又进一步提高，包括产量的提高及脱氢奎尼酸 和侧向肌肉萎缩等[6] 。 合成酶、脱氢奎尼酸酶等酶活的提高，该菌株生理 VK2 生产以化学合成法为主，微生物发酵法生 活性较强。Yoshiki 等[16]通过对脑膜炎败血性黄杆菌 产 VK