几种酶的测活SODPODGSH.docVIP

酶样的制备　 取肝、鳃组织约0.1—0.2 g,以1∶20 (w/v)的比例加入预冷0.01 mol/L pH 7.2 磷酸盐缓冲液,冰水浴中低速匀浆, 4℃下离心(16000 r /min, 10 min) ,取上清液, 即为组织酶提取液。 过氧化物酶（CAT）测活 取光径1cm比色杯？2只，于1只中加入反应混合液3ml，KH2PO4 1ml,min﹒mgg）Folin法进行。 超氧化歧化酶（SOD）测活 测定前在54ml 14.5mmol/L dl-甲硫氨酸？中加入EDTA、NBT、核黄素溶液（避光保存）各2ml，混匀，此为反应混合液。在盛有3ml反应混合液的试管中，加入适量的粗酶液（以使抑制达50%左右的酶浓度为佳），混合均匀后放在透明试管架上，于光照培养箱中准确照光10min,迅速测定560nm下的OD值，以不加酶液的光照管为对照，计算反应液被抑制的百分比。 你有更好的测定方法吗？ 以上的两个侧活性方法来自植物生理学实验教材 方法一：丙二醛（MDA）测定 1将冷冻的样品加入1ml 10%三氯乙酸（TCA）溶液室温下放置5-10min,用超声波处理一次（5s）,然后转移至对应标号的试管中，加入1ml 10%TCA洗涤离心管一次转移至对应标号的试管中 2取2ml 0.4%硫代巴比妥纳溶液分别加入到各试管中震荡混匀 3试管中放入热水中煮沸20min，期间转换试管位置，然后加入冷水至烧杯中时试管冷却，放置室温10min左右 4将冷却的溶液转入至对应的离心管中，并分别与装有4ml水的离心管平衡（平衡时加入的液体为10%TCA） 5平衡后的离心管放入离心管机中进行离心（8min*5000rmp）离心后收集上清液置于对应标号的试管中不要沉淀 6在预热30min的分光光度计下调定吸收值，波长分别为532、600、450nm，要求每次测定完后倒入原来的管号中 方法二：丙二醛含量的测定（MDA）拟采用 显色反应及测定 吸取2 mL提取液，加入2mL0.6%硫代巴比妥纳（TBA）液，混匀，在试管上加盖塞，置于水浴中沸煮（用电热套烧水不安全，能买个电饭煲吗？） 15min，迅速冷却，离心。取上清夜测定532nm、540nm处的OD值，对照管以2 mL水代替提取液。然后计算每克样品中MDA的含量。C=6.45OD532-0.56OD450 （1） 式中：C—为MDA的浓度，mg/L。 MDA含量= C*V/(A*1000) （2）式中：C—MDA浓度，mg/L；V—提取液总体积，mL；A—取样鲜重，g。 方法一：还原型谷胱甘肽（GST）测活 分光光度法 在25 mL比色管中, 分别加入0. 9 mL显色剂、5. 0 mL pH 值为4. 0 的HAc-NaAc缓冲溶液及适量的还原型谷胱甘肽标准溶液, 用蒸馏水定容, 迅速塞紧比色管, 放入沸水浴中加热10m in, 取出, 用流水冷却10 min, 以试剂空白为参比, 用1 cm 比色皿在490 nm处测量吸光度。 显色剂: 称取邻菲罗啉0.0910 g, 加入1 mol/L盐酸溶液2mL、硫酸铁铵0.2380 g, 溶解后用水稀释至100 mL; 方法二：DTNB法 拟采用 方法：样品1 式2 份，pH8.0 条件下分别和甲醛反应2 min 和60min，各取1mL 加入5mLDTNB 溶液，25℃反应5min 后分别测定在波长412nm 的吸光度，算出2者的差值△A，代入标准曲线计算得出谷胱甘肽含量。得到谷胱甘肽浓度在0.19—0.95gL-1之间线性关系良好，回归方程为：Y=0.7154X-0.0004，r=0.9999，最大误差不超过6%。 GSH 和DTNB 反应生成黄色的5- 硫代-2 硝基苯甲酸，在412nm 波长有最大吸收峰。 在实验室的药品清单中我发现有Catalase(EC)（CAT）和SUPEROXIDE DISMUSTASE(SOD)，请问这两个药品是用来干什么的？我们不是要测这两种酶的活性吗？怎么有这两种酶的成品？