基因工程原理和操作步骤23PPT.pptx

第2节　基因工程的原理和技术目标导读1、简述基因工程原理2、概述基因工程基本操作的的基本步骤重难点击1、获得目的基因的方法2、形成重组DNA分子、将重组DNA分子导入受体细胞3、筛选含有目的基因的受体细胞、目的基因的表达基因工程的基本原理：让人们感兴趣的基因（目的基因）在宿主细胞中稳定和高效表达。1获得目的基因2形成重组DNA分子（核心）将重组DNA分子导入受体细胞34筛选含有目的基因的受体细胞5目的基因的表达自主学习一　获得目的基因、形成重组DNA分子阅读P5-6介绍，以大肠杆菌产生人胰岛素为例：2min1.目的基因是什么？如何获得目的基因？3.如何形成重组DNA？为什么用同种限制性核酸内切酶？(1)已知基因序列①用 (PCR)扩增。 ②用 合成；(2)未知基因序列：从 中获得。聚合酶链式反应化学方法基因文库切出来的粘性末端相同,才能将目的基因和载体连接.PCR——体外复制特定DNA片段①高温变性：95℃。②低温退火：55℃。③适温延伸：72℃。 化学合成——不需要模板链基因较小，氨基酸或核苷酸序列已知，可用DNA合成仪合成推测合成推测蛋白质的氨基酸顺序DNA的核苷酸序列目的基因mRNA核苷酸序列合成逆转录目的基因的信使RNA单链DNA目的基因基因文库-保存受体菌，菌中含基因鸟枪法基因组DNA文库cDNA文库问题探究1.用同种限制酶切割目的基因和载体后，DNA连接酶一定能连接 目