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尿素酶试验 细菌产生尿素酶，分解尿素产生氨，使得培养基变碱，酚红→红色 * 四、消毒与灭菌 灭菌是指用物理或化学方法将所有致病和非致病的微生物全部杀灭。细菌的芽孢具有较强的抗热能力，因此灭菌效果，常以杀灭芽孢为准。 消毒是指杀灭物体上的微生物的繁殖体，不能保证杀死芽孢或孢子。 * 高压蒸汽灭菌法： 利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升，以达到高温灭菌目的的方法。 方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2）-20min。 适用：耐高温物品。 注意事项： 排净冷空气； 灭菌终了，缓慢降压； 灭菌结束，零磅开盖。 * 实验报告要求 1、本次试验采用了4种接种培养方法 ，写出操作方法、结果观察、用途。 2、培养基制备方法的流程。 3、高压蒸汽灭菌法的操作要点。 4、单糖发酵试验、IMViC试验原理及结果判断 * 实验四 药物的体外抗菌试验(第16周) 1、药敏试验－纸片法 学生操作 每人做 2、药物MIC和MBC的 测定 讲解 3、药物的细菌总数和霉菌总数测定 学生操作 4人/组 * 药物体外抗菌试验：102页 （1）琼脂扩散法：原理、操作方法和适用范围： K-B纸片法（适合药物敏感试验） 管碟法（适合抗生素效价测定） 挖沟法（适合中药抗菌试验） （2）连续稀释法（适合测定药物的MIC） * 药物敏感试验 K-B纸片法：试验菌---培养（37℃12小时）---涂布平板（0.1ml菌液）---加含药纸片（37℃24小时）---量抑菌圈---参照表10-2按照表10-1方式报告结果 * 纸片法 1、细菌培养。 2、用无菌吸管吸取一滴菌液滴加在琼脂平板上，用无菌涂布棒（L棒）将菌液在整个平板上涂布均匀。 3、用无菌镊子取四种抗生素滤纸片各一片，轻轻贴于培养基相应区内，用镊子稍压使之贴紧。（化学消毒剂的抑菌实验也采用同样的方法） 4、皿底向上放于37℃温箱中，培养18—24小时观察抑菌环直径大小，以判定其敏感程度。 * 注意事项 （1）试验菌的生理状态（大肠杆菌、葡萄球菌的肉汤培养物）（2人/组） （2）MH培养基和MHA培养基的用途 （3）菌的涂布 （4）加含药纸片 （ 5）标记 （6）培养 （7）量抑菌圈 （8）结果报告（中介度与中度敏感意义上的差别） * 连续（试管）稀释法 试管编号---药物倍比稀释---加入定量测试菌---结果判断(以无细菌生长的最高药物稀释度为该药物对试验菌的MIC) * 连续稀释法 在一系列试管中,将液体培养基按一定倍数稀释药物,在每一管中加入定量试验菌,经培养后,肉眼观察试管混浊情况,记录MIC。 最小抑菌浓度（MIC）：能抑制测试菌生长的最低药物浓度即为MIC。 * * 细菌总数的测定 琼脂倾注平皿计数法：稀释药物→ 取一定量稀释液和55℃ 琼脂混匀→ 37 ℃24-48小时→计数平板内菌落 * 细菌总数测定 1、药液稀释：（1/10）-（1/100）-（1/1000）-（1/10000） 2、倾注平板：1ml稀释液+15ml琼脂培养基（45℃） 3、培养：37 ℃、48小时 4、菌落计数： 5、菌数报告：见表7-2及举例 * 霉菌和酵母菌总数测定 培养基、培养条件 * 实验报告要求 药物敏感试验的原理、方法、结果； 连续（试管）稀释法测定MIC的原理、方法、结果判断 细菌总数测定原理、方法、结果 * 实验报告要求 6个图 标本制作方法 革兰染色方法 革兰染色的原理及应用意义 病原菌的一般检验程序 * 实验二 综合性实验：细菌形态观察与分离培养（一）（14周） 一、普通肉汤培养基的制备 教师操作并讲解 二、细菌的接种和培养 平板、斜面、半固体和肉汤 学生操作 1套/人 三、细菌的培养技术 教师示讲 四、细菌的生化反应 教师示讲 五、消毒与灭菌 示范与讲解 * 一、培养基的制备 人工培养细菌，最重要的是给细菌提供所需的营养物质，这种营养物的制品称为培养基。 培养基制备的原则： ①适当的营养成分 ②合适的酸碱度 ③配制后经灭菌后方可使用 * 细菌生长所需营养物质 水、碳源、氮源、无机盐、生长因子 * 普