Tet基因表达调控系统及其应用44.pdf

中国医药生物技术2007年8月第2卷第4期 姗 ChinMedBiotechnoLAugust2007，V01．2。No．4 Tet基因表达调控系统及其应用 芦小燕，解慧琪，邓力 基因治疗中导入基因表达时间和水平的调控极其重要。 个系统中，蛋白的调控表达与强力霉素的量以及诱导时间相 哺乳动物细胞中用到的诱导型载体主要与启动子有关，如热 关联。 休克蛋白(Hsp)启动子可在高温下被诱导，还有重金属、 1．2 Tet系统的改进 糖皮质激素诱导的启动子等，但这些系统均存在着诱导表达 Tet系统被广泛应用的过程中暴露出了不少问题，如 不具备特异性、系统处于关闭状态时表达有遗漏以及诱导剂 TRE长期诱导表达的不稳定性，以及前后转染2个质粒到 本身具有毒性会对细胞造成损伤等缺陷。如果设置一种导入 同一细胞中需要采用两步法而费时费力等。为此，科学家们 基因的“开关”，能调控基因的表达，则有望大幅度提高基 在努力对其进行改造。研究发现，诱导表达的不稳定性是由 因治疗在临床应用的安全性。1992年，Gossen和Bujard[1】于tTA和rtTA有隐蔽剪接位点、原核密码子和完整的 首次成功地利用原核基因调控元件构建了真核细胞基因表 VPl6结构域，于是有研究者将rtTA的5个氨基酸置换， 达调控系统——四环素基因表达调控系统(Tet系统)，该用人工化的密码子切除隐蔽剪接位点，以最小的VPl6结 系统能通过在培养基中加入或者去除四环素或其衍生物(如 强力霉素)诱导或抑制所感兴趣基因的表达，故被广泛应用 诱导表达的稳定性提高【31；有研究者将Tet系统改造成具有 于基因表达调控、蛋白质功能和基因功能研究以及基因治疗 新霉素耐受基因和容易调节基因表达的启动子，不仅提供了 研究中。本文就近年来Tet系统的研究进展等做一综述。 一个简单的基因筛选标记，还提高了转染率，使基因表达更 稳定朋；还有研究者通过含有抗性基因增强型绿色荧光蛋白 1 Tet系统概述 (EGFP)和荧光素酶基因的双向调控质粒，采用Tet系统 1．1 Tet系统作用原理 和构建质粒共转染，一步得到了表达rtTA的细胞克隆，既 大肠杆菌转座子Tnl0中Tet阻遏因子(Te吸)负性省时又省力【5】。病毒载体具有较高的转染效率，因此可将病 调节四环素抗性操纵子，TetR与四环素有很高的亲和性， 毒载体与Tet系统作用元件相结合以达到提高转染效率、 在无四环素时，TetR与Tet操纵因子序列(TetO)结合而 诱导高水平的基因表达的目的。Peng等【6】通过带有高效率 阻断四环素抗性基因的表达；当四环素存在时，TetR对 自我阻碍性的反转录病毒载体，有效转染来自肌肉的干细 Teto的阻遏解除，转录启动，从而调控基因的表达。此原 胞，体外能诱导高水平的基因表达，在体内也能系统调节骨 理应用到哺乳动物实验系统中，由表达TetR的质粒与另一 的形成。Berenjian掣’7】利用单病毒染色体的二元腺病毒载 element，TRE)体来编码TRE和Tet系统转录激活蛋白，并引入阻碍转 个含有四环素调控元件(tetracycline．response 和目的基因片段的质粒构成let系统中两个重要的组成部 录延伸的乳糖抑制蛋白，使该系统更为多能化，蛋白表达也 分，后者上游为TRE，多克隆位点在TRE下游，并且因 其含缺乏增强子的启动子——下游巨细胞病毒最小启动子 (minimalimmediate of earlypromotereytomegalovims)而不 能单独启动外源基因的表达。基于表达的调节蛋白不同， 中条件性调控表达，但是随后发现Blm的遗漏表达是Tet let系统分为let激活系统(Tet．on)和let抑制系统系统中的一个障碍，于是他们进一步研究出通过Tet-off系 (Tet-off)。在Tet-off系统中，TetR的第1～207个氨基