中华鳖细菌疫苗免疫佐剂的筛选及其初步应用-大连海洋大学.PDFVIP

第25卷第1期 大 连 水 产 学 院 学 报 Vol.25 No.1 20 10 年2 月 JOURNAL OF DALIAN FISHERIES UNIVERSITY Feb . 2010 文章编号:1000-9957(2010)01-0019-05 中华鳖细菌疫苗免疫佐剂的筛选及其初步应用 郝贵杰, 潘晓艺, 姚嘉赟, 徐洋, 尹文林, 沈锦玉 (浙江省淡水水产研究所, 浙江 湖州313001) 摘要:将分离自中华鳖Trionyxsinensis 主要细菌性疾病———肠道出血性败血症、 鳖穿孔病 (疖疮病)、 红脖 子红底板病、 鳖腐皮病的4株病原菌, 在体积分数为3郾5%的福尔马林溶液中灭活24 h。 在灭活的4 株菌 9 中添加不同佐剂, 充分混匀后分别制备成总含菌量为6伊10 个/ mL 的4 价菌苗, 分别免疫8 只ICR小鼠, 并设不加佐剂免疫组及空白组作为对照。 经3次免疫后, 随机选3 只小鼠抽血制备血清, 用间接ELISA方 4 5 法测定抗体效价, 除空白对照组外, 其它4组小鼠的免疫血清效价为1 颐1郾6伊10 ~1 颐2郾56伊10 , 各免疫组 的效价依次为弗氏佐剂白油佐剂蜂胶佐剂不加佐剂。 另外5 只小鼠用于免疫保护性试验。 结果表明: 3 种佐剂的免疫保护率均为100%, 而不加佐剂组免疫保护率为80%, 空白对照组死亡率为100%。 考虑到 弗氏佐剂的成本较高且白油佐剂有副作用, 故选择蜂胶作为免疫佐剂, 制备了中华鳖4 价菌苗。 用该菌苗 免疫接种50 只体重为100~150 g/ 只的健康中华鳖, 注射剂量为0郾2 mL/ 只, 并设置对照组 (注射等量的 生理盐水), 共接种20 只健康中华鳖。 分别于免疫后第20、 30、 40、 50天随机采集3只受免疫的中华鳖和 对照组的1只中华鳖血液并制备血清, 用浙江省淡水水产研究所制备的针对中华鳖IgM 的单抗3H3介导的 ELISA方法, 测定血清中的抗体效价。 结果表明: 当中华鳖免疫后40 d, 血清中抗体效价达到最高, 为1 4 6 颐6郾4伊10 ; 免疫后50 d将受免中华鳖分成4 组, 分别用4 种菌株以5LD (9伊10 个/ mL) 进行攻毒试验 50 (0郾5 mL/ 只), 结果免疫保护率均达到100%, 而对照组死亡率均为100%。 关键词:中华鳖; 细菌疫苗; 佐剂; 免疫预防; 单克隆抗体 中图分类号: S947郾1摇 摇 摇 摇 文献标志码: A 摇 摇 近年来, 在中华鳖 Trionyx sinensis 的养殖生产 挑选4株对鳖危害性较大的温和气单胞菌制备菌 中, 鳖的疾病越来越多, 因而造成巨大的经济损 苗, 并选择3种不同佐剂进行免疫, 筛选合适的免 [1] 失 。 目前, 引起中华鳖的主要细菌性疾病有肠 疫佐剂, 旨在为进一步开发研制鳖用疫苗, 有效地 道出血性败血症、 鳖穿孔病 (疖疮病)、 红脖子红 防治鳖的病害提供参考依据。 [2] 底板病、 鳖腐皮病等。 沈锦玉等 已从这些