-第六章好氧发酵产物积累机制.ppt

第六章 好氧发酵产物积累机制; 在有氧条件条件下： 丙酮酸进入线粒体，脱氢和脱羧生成乙酰COA，在TCA循环中脱氢，并氧化形成CO2和 H2O，或者各种代谢物，NADH2经呼吸链将氢传递给氧生成水。 另外，乙酰辅酶A在生物合成过程中作为C2化合物加以利用，形成脂肪等。 ;第一节 柠檬酸的发酵机制 一、柠檬酸的合成途径 黑曲霉 (Asp.niger)　　　 原料：sugar ， alcohol， acetic acid 途径： EMP（HMP） 丙酮酸羧化 TCA环 黑曲霉生长，EMP与HMP途径的比率是2：1，生产柠檬酸时为4：1。 葡萄糖 柠檬酸(citric acid) 理论转化率106.7%;目的产物;柠檬酸的生物合成途径;二、 柠檬酸生物合成的代谢调节; 1 糖酵解及丙酮酸代谢的调节;　　由于TCA循环降低，ATP的生成减少，蛋白质和核酸合成受阻，细胞内的NH4+异常高，从而降低了柠檬酸对PFK的抑制。 柠檬酸发酵需要下述环境条件： 磷酸盐浓度低；氮源为NH4+盐； pH值低（低于2.0）； 溶氧量高；Mn2+ 、 Fe2+ 、 Zn2+含量极低。 　　柠檬酸发酵中黑曲霉对Mn2+极端敏感。黑曲霉在缺锰的条件下发酵 ，细胞有生理和代谢的变化。 　　Mn2+的效应可以认为是NH4+水平升高而减弱了柠檬酸对EMP途径关键酶（PFK）的抑制。 ;第二个调节的酶是丙酮酸激酶（PK） 　 PK 被NH4+ 、K+激活 磷酸烯醇丙酮酸－－－－丙酮酸＋ATP 二氧化碳的固定反应 参与二氧化碳固定反应的酶： 丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶;　 2 　TCA环的调节; II 阻断顺乌头酸酶的催化作用：该酶是个含铁的非血红蛋白，以Fe4S4作为辅基。因此，在菌体生长到足够菌数时，适量加入亚铁氰化钾（黄血盐），使与铁硫中心的Fe++ 生成络合物，则该酶失活或活性减少，而积累柠檬酸。 III 通过诱变或其他方法，造成生产菌种顺乌头酸酶的缺损或活力很低，同样积累柠檬酸。 3 及时补加草酰乙酸 　　 外加草酰乙酸　 选育回补途径旺盛的菌种。; 柠檬酸积累机理; 4、丙酮酸氧化脱羧生成乙酰辅酶Ａ和丙酮酸固定CO２反应相平衡，以及柠檬酸合成酶不被抑制，增强了合成柠檬酸的能力。 　 5、柠檬酸积累增加，pH降低，在低pH条件下，顺乌头酸水合酶和异柠檬酸脱氢酶失活，从而进一步促进了柠檬酸自身的积累。; 第二节醋酸发酵机制 淀粉 糖 酒精 醋酸 1. 醋杆菌发酵酒精成醋酸 乙醇向醋酸转化是分两步进行的，中间产物是乙醛。 CH3CH2 OH E1 CH3CHO E2 CH3COOH E1 乙醇脱氢酶 或乙醇氧化酶，它依赖于NAD。 E2 乙醛脱氢酶 ，需要NADP作辅酶。 醋杆菌为G-，好氧菌， 　 1mol乙醇转化为1mol醋酸，理论转化率是130％。 ; 2 热醋酸梭菌生产醋酸 热醋酸梭菌在发酵糖类时，由糖到醋酸一步完成，还可以将CO2还原为醋酸。 CO2是通过甲酰四氢叶酸（THF）和类咕啉蛋白形成醋酸的。但该菌没有氢化酶活性，不能利用氢气。 C6H12O6 +2H2O 2CH3COOH+2CO2+8H++8e 2CO2+8H++8e CH3COOH+ 2H2O 净反应　　C6H12O6　　　　　　 3CH3COOH 　　反应在厌氧条件下进行的，由己糖或戊糖生成醋酸的理论产率都是100％。 　　热醋酸梭菌为产芽孢菌，Ｇ＋，周生鞭毛，耐高温，最适生长温度55～60°C，转化率高，严格厌氧，还可以利用戊糖。但这种方法发酵时需中和剂，因此只适合于醋酸盐。 　　;第三节 谷氨酸发