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主要内容 一、柠檬酸生产的历史 二、?柠檬酸发酵微生物 三、柠檬酸生物合成途径 四、柠檬酸发酵工艺 五、柠檬酸提取 ? 丰原生化 玉米为原料 葡萄糖为碳源 糖经EMP、HMP途径形成丙酮酸。 积累柠檬酸要求在发酵过程中培养基中Mn 2+浓度要低， 导致NH 4+浓度升高；侧系呼吸链，发酵时不能缺氧。 4.异柠檬酸脱氢酶 柠檬酸浓度升高到某一水平就抑制异柠檬酸脱氢酶活力，从而进一步促进了柠檬酸自身积累 随着柠檬酸积累，pH降低到一定程度时，使顺乌头酸酶和异柠檬酸脱氢酶失活(顺乌头酸酶、异柠檬酸酶在pH2.0时失活)，更有利于柠檬酸的积累及排出细胞外。 黑曲霉利用糖类为原料生产柠檬酸时，柠檬酸如何积累？ 正烷烃为碳源 正烷烃氧化成脂肪酸 脂肪酸β氧化生成乙酸 与乙酸代谢途径相同完成柠檬酸合成 柠檬酸生产工艺 液体发酵法 固体发酵法 固态发酵 固态发酵是以薯干粉、含淀粉的农副产品为原料，配好培养基后，在常压下蒸煮，冷却至接种温度，接入种曲，装入曲盘，在一定温度和湿度条件下发酵。 液态浅盘发酵 液态浅盘发酵多以糖蜜为原料，其生产方法是将灭菌的培养液通过管道转入一个个发酵盘中，接入菌种，待菌体繁殖形成菌膜后添加糖液发酵。发酵时要求在发酵室内通入无菌空气。 种子制备 ①斜面种子培养：斜面培养基为10-12。Bx的麦芽汁或米曲汁，也可采用20％马铃薯煮出汁琼脂培养基，33—35℃培养4—5d，至斜面长满孢子即可。 ②麸曲制备。用1000ml角烧瓶装麸皮40g左右。麸曲的含水量要合适，一般控制在60％一65％左右，麸曲种子的培养温度约34℃．培养1天后要“敲瓶”一次，使之上下翻动。 ③种子罐培养。种子罐体积一般为发酵罐的1／10，薯干粉浓度为8％一14％，添加0.15％(NH4)2SO4。 种子罐培养温度为32℃,培养时间22—24h，至略微产酸即转入发酵罐中。 柠檬酸发酵条件的影响 温度、pH、种子质量、溶氧、微量元素 a 、 通气与搅拌(溶氧)对柠檬酸发酵的影响　　　 b、pH的影响 c 、微量元素与柠檬酸发酵 Mg2+ 、Zn2+、 Mn2+、 Cu2+、 Fe2+和S、P、K、Na等元素影响黑曲霉生长。 五、柠檬酸的提取工艺 发酵液中除含柠檬酸外，还含有黑曲霉菌丝体及自溶物、原料残渣(主要是纤维素)、未利用的还原糖、非发酵性糖以及发酵过程产生的色素及其他有机酸等。 提取柠檬酸的方法主要有钙盐法、离子交换法、萃取法、电渗析法以及近年来发展起来的色谱分离法；但目前普遍使用的仍然是钙盐法。 发酵液预处理 预处理是指待发酵液加热至75—90℃，可以及时杀死柠檬酸产生菌及其他杂菌，终止发酵作用。 同时使发酵液中部分蛋白质变性、絮凝、降低酵液浓度利于过滤。 此外也可能使菌体内部分柠檬酸释放出来。 中和 Ca 2+ 在一定温度和pH条件下可与柠檬酸作用生成柠檬酸钙。出于形成的Ca3(C6H5O7)2·4H2O在水中的溶解度极小，因而能形成沉淀面与其他杂质，如糖、可溶性蛋白等分离。 生石灰(CaO)、熟石灰[Ca(OH)2 ]、氯化钙(CaCl2)以及碳酸钙等均可作为中和剂，但最常用的是碳酸钙。 碳酸钙中和时的反应方程式为： 酸解 酸解是指柠檬酸钙与硫酸等强酸作用,在强酸作用下使柠檬酸钙转变为柠核酸游离出来，同时形成硫酸钙。由于后者的溶解度极小，难溶于水而形成沉淀，从而达到进一步的分离纯化作用。 净化 净化工艺包括脱色和离子交换树脂除去杂质离子 结晶 蒸发浓缩至规定浓度的柠檬酸液可进行结晶。 一水柠檬酸与无水柠檬酸结晶的临界温度为36．6℃：低于36.6℃时结品得到的是一水柠檬酸，高于36．6℃结品得到的是无水柠檬酸。 黑曲霉 生长繁殖阶段： 黑曲霉 产酸阶段： 发酵15—30h这一阶段，菌体大 量生长繁殖耗氧量最大。 耗氧虽略有减弱，而在这一时期缺氧造成的损伤是不可逆的。 因此在整个发酵过程中一刻也不能停止通气和搅拌，才能保证溶氧的供应。 菌体生长期pH：4.5左右 糖化适宜pH：3~4 产酸阶段pH ：2~2.5 黑曲霉边糖化边产酸 在薯干粉的柠檬酸发酵中，初始pH（5.5）， 48h后pH会到达2.0，抑制糖化酶的作用。控制低风量，减慢菌体生长，有充分时间糖化完全。 Mn2+参与黑曲霉的多种代谢， Mn2+既是异柠檬酸脱氢酶和草酰乙酸酶的组成都分，又是TCA循环中多种酶的激活剂，还参与蛋白、核酸的合成， Mn2+浓度高时，柠檬酸合成明显受影响，其作用远甚于Fe2+ 。如前所述， Mn2+的不足可使细胞内NH4+浓度升高．从而解除柠檬酸对酵解途径的抑制作用。 我国在提取率、机械化程度和劳动生产率等方面比较落后，因而在