十字花科黑腐病菌hrpG基因原核表达汇编.pdfVIP

基因组学与应用生物学，2011年，第 30卷，第 5期，第577—582页 GenomicsandAppliedBiology，2011，Vo1．30，No．5，577—582 研究报告 A Letter 十字花科黑腐病菌hrpG基因原核表达 冯国芳 0 袁夏莹 ，z 陆光涛 1广西大学生命科学与技术学院，南宁，530005；2亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁，530005 通讯作者，lugt@gxu．edu．ca 摘 要 在十字花科黑腐病菌See1中，hrp基因对寄主的致病性和非寄主的超敏反应中起核心作用，而hrpG 对整个 hrp基因簇起调控作用。HrpG为 OmpR家族 的双组分系统感受调控蛋 白，含有两个结构域，分别是N 端Responsereg和C端TransregC。本研究利用表达载体pQE一30Xa，成功构建了HrpG的表达重组子，在 E．coliM15[pREP4]中进行诱导表达。通过调节诱导温度、IPTG浓度和诱导时间最终确定在温度为20℃， IPTG浓度为0．8mmol／L，诱导表达4h。hrpG基因在宿主细胞E coliM15获得高效可溶性表达。目前尚未有 可溶性HrpG蛋 白获得成功表达的报导，本研究中获得HrpG蛋白在大肠杆菌获得大量可溶性的表达，将为 in itro研究HrpG的生理活性，特异的结合位点和调控功能研究打下 良好基础。 关键词 十字花科黑腐病菌，HrpG，结构特性，原核表达 ProkaryoticExpression ofhrpG Genefrom Xanthomonas campestrispv． campestrts FengGuofang 1 YuanXiaying LuGuangtao ， 1CollegeofLifeScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning，530005；2StateKeyLaboratoryforConservationandUtilizationofSubtropi— calAgro—bioresources，Nanning，530005 Correspondingauthor，lugt@gxu．edu．cn DOI：10．3969／gab．030．000577 Abstract hrpclusterisregulatedbyhrpG，whichplaysanimportantcoreroleininvasionandnon—hosthypersen- sitiveresponsetopathogesishost．HrpG isonememberoftheOmpR familyresponsereug latorwithtwoconserved domains，whicharetheregatN terminalandtheTransreg C atC temr inal，respectively．Architecturecharacter— _ _ isticanalysisshowsthatthesetwodomainsarequitedifferentfrom eachother．Inthisstudy，wesucceedtocon— structtherecombinantplasmidtoexpressthegeneofhrpGinE coliM15 [pREP4]，whenthesequenceofhrpG genewasinsertedintotheexpressionvectorofpQE一30Xa．Uptonow，thereisnoreportabouttheexpressionof solubleHrpGprotein．InordertogetthesolubleHrpGproteinwithahigheryield，thereactionofexpressionofthe hrpGproteinwasoptimizedbyadjustingthetempreutreandtheconcentrationofIPTGandthetimeforinduction respectively．Theresultshow thebestoptimum conditionofrofthesolubleHrpGproductioninsupernatantofcell disrutionisinducedat20~C ofr4hwithIPTG concentration0