实验七、培养基配制和高压蒸汽灭菌 .pptVIP

实验七培养基的配制与高压蒸汽灭菌 主 讲:徐尔尼 生命科学学院生物技术系 * 一、目的与要求 了解培养基的配制原理。 掌握配制培养基的一般方法和步骤。 了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。 学习高压蒸汽灭菌的操作方法。 * 二、基本原理 1、培养基的配制 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。用以培养、分离、鉴定、保存各微生物或积累代谢产物。培养基包括有：碳源物质、氮源物质、无机盐类、水等，由于培养的微生物种类不同，培养的目的不同，因此，培养基的组成也就不同。 * 二、基本原理 2、高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于1000C的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 * 三、实验器材 1、试剂或溶液　用于配制培养基所需的各种化学试剂，1mol/L NaOH 、1mol/L HCl　等。 2、仪器其他用具　　试管、500ml三角瓶、烧杯、培养皿、杜氏小倒管、量筒、玻棒、天平、称量纸、牛角匙、电炉、pH试纸（pH5.5-9.0）、试管塞、三角瓶塞、牛皮纸、记号笔、橡胶筋等。 * 四、操作步骤 1、培养基的配制 1）牛肉膏蛋白胨培养基 称量→加热溶化→调pH至7.0-7.2→分装在500ml三角瓶内→加塞→包扎→1210C灭菌20min 2）淀粉培养基的配制 称量→ 加热溶化→ 分装在250ml三角瓶内→加塞→ 包扎→ 1210C灭菌20min * 3）明胶培养基的配制 称量→加热溶化→ 调pH至7.2-7.4 → 分装在试管内，装量为试管高度的1/3为宜→ 加塞→ 包扎→1210C灭菌30min → 取出直立 4）乳糖蛋白胨培养基的配制 称量→ 加热溶化→调pH至7.2-7.4 → 加入1.6%溴甲酚紫乙醇液指示剂→ 混匀→分装在放有小倒管的试管中→1150C灭菌20min 5）葡萄糖蛋白胨培养基的配制 称量（将乳糖改为葡萄糖） → 加热溶化→ 调pH至7.2-7.4 → 加入1.6%溴甲酚紫乙醇液指示剂→ 混匀→ 分装在放有小倒管的试管中→ 1150C灭菌20min * 注意事项： 称药品时严防药品混杂，一把药匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再取另一种药品。试剂瓶盖不要盖错。 在配制好培养基后一定要注意调培养基溶液的pH。 在烧杯融化琼脂和明胶的过程中，人要在电炉旁看着，以免培养基因沸腾而溢出烧杯。同时，需不断搅拌，以防琼脂和明胶糊底烧焦。 分装过程中，注意不要使培养基沾在管口上，以免沾污试管塞而引起污染。 * 培养基配制实验分组与任务 全班分8个组，一排为一组，每组六人 第1-2组：各配制500ml淀粉培养基。装入2个250ml三角瓶内。 第3-4组：各配制400ml明胶培养基，分装40支试管，每支试管装液量为试管高度的三分之一，灭菌后直立摆放。 第5组：配制400ml葡萄糖发酵培养基，分装成45支试管，每支试管装液量以浸没小倒管为宜。 第6组：配制400ml乳糖发酵培养基，分装成45支试管，每支试管装液量以浸没小倒管为宜。 第7组：配制400ml牛肉膏蛋白胨培养基,装入一个500ml三角瓶内。 第8组：配制200ml牛肉膏蛋白胨培养基,分装成20支试管，每支试管装液量为试管高度的四分之一，灭菌后摆成斜面 * 四、操作步骤 2、高压蒸汽灭菌 检查高压锅水位→ 将待灭菌物品放在提篮里→ 盖上锅盖，旋紧螺丝→ 加热，打开放汽阀，排出冷空气→ 直至冒出白色蒸汽为止→ 关闭放汽阀→ 上磅至所需压力→ 维持至所需时间→ 切断电源→ 待压力降至零打开锅盖，取出灭菌物品→ 摆成斜面或直立→ 冷凝后置370C培养箱内培养24h，检查灭菌是否彻底 * 压 力 数 全部空气排出时的温度/0C 2/3空气排出时的温度/0C 1/2空气排出时的温度/0C 1/3空气排出时的温度/0C 空气全不排出时的温度/0C MPa Kg/cm2 Ib/in2 0.03 0.07 0.10 0.14 0.17 0.21 0.35 0.70 1.05 1.40 1.75 2.10 5 10 15 20 25 30 108.8 115.6 121.3 126.2 130.0 134.6 100 109 115 121 126 130 94 105 112 118 124 128 90 100 109 115 121 126 72 90 100 109 115 121 灭菌锅留有不同分量空气时,压力与温度的关系