实验八：逆境对植物生理生化指标影响(脯氨酸 .pptVIP

实验八：逆境对植物生理生化指标的影响（脯氨酸及相对电导率） （一）实验目的及意义 （二）实验原理 （三）实验步骤 （四）实验报告 * * 实验目的和意义 本实验设计主要通过培养植物的幼苗，给予幼苗不适宜的干旱胁迫处理，来研究植物对逆境的反应，通过测定幼苗的膜透性、脯氨酸含量的变化，研究逆境对植物生长的影响及植物内部的生理生化机理。 * * 实验原理 脯氨酸是水溶性最大的氨基酸，具有很强的水合能力，其水溶液具有很高的水势。脯氨酸的疏水端可和蛋白质结合，亲水端可与水分子结合，蛋白质可借助脯氨酸束缚更多的水，从而防止渗透胁迫条件下蛋白质的脱水变性。因此脯氨酸在植物的渗透调节中起重要作用，而且即使在含水量很低的细胞内，脯氨酸溶液仍能提供足够的自由水，以维持正常的生命活动。 * * 实验原理 正常情况下，植物体内脯氨酸含量并不高，但遭受水分、盐分等胁迫时体内的脯氨酸含量往往增加，它在一定程度上反映植物受环境水分和盐度胁迫的情况，以及植物对水分和盐分胁迫的忍耐及抵抗能力。 植物体内脯氨酸的含量可用酸性茚三酮法测定。在酸性条件下，脯氨酸和茚三酮反应生成稳定的有色产物，该产物在520nm有一最大吸收峰，其色度与含量正相关，可用分光光度法测定。该反应具有较强的专一性，酸性和中性氨基酸不能与酸性茚三酮试剂形成有色产物，碱性氨基酸对这一反应有干扰，但加入人造沸石（permutit），在PH 1~7范围内振荡溶液可除去这些干扰的氨基酸（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸，精氨酸等2—氨基的氨基酸）。 * * 实验原理 植物细胞膜起调节控制细胞内外物质交换的作用，它的选择透性是其最重要的功能之一。当植物遭受逆境伤害时，细胞膜受到不同程度的破坏，膜的透性增加，选择透性丧失，细胞内部分电解质外渗。膜结构破坏的程度与逆境的强度、持续的时间、作物品种的抗性等因素有关。因此，质膜透性的测定常可作为逆境伤害的一个生理指标，广泛应用在植物抗性生理研究中。 当质膜的选择透性被破坏时细胞内电解质外渗，其中包括盐类、有机酸等，这些物质进入环境介质中，如果环境介质是蒸馏水，那么这些物质的外渗会使蒸馏水的导电性增加，表现在电导率的增加上。植物受伤害愈严重，外渗的物质越多，介质导电性也就越强，测得的电导率就越高（不同抗性品种就会显示出抗性上的差异。） 本实验采用电导率法测定电解质的相对外渗率，来了解干旱情况下植物受害的程度。 * * 实验材料和器材 器材：分光光度计、水浴锅、烘箱、天平、带塞试管、烧杯、研钵、石英砂、漏斗、滤纸、玻棒 、电导率仪 试剂：80%乙醇、酸性茚三酮试剂、脯氨酸标准母液、人造沸石、活性碳 实验材料 绿豆苗 * * 实验步骤 分别吸取上述各标准溶液2mL，冰醋酸2mL，茚三酮试剂2mL，加入到10mL带塞刻度试管中，塞上塞子，于沸水浴中加热15分钟，用分光光度计测定520nm的光密度值，以零浓度为空白对照。将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标制作标准曲线。 1．脯氨酸标准曲线制作：吸取脯氨酸标准母液0, 0.5, 1.25, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0, 15.0mL分别放入8个50mL容量瓶中，分别加入蒸馏水定容至50mL，配成0.0，1.0，2.5，5.0，10.0，15.0，20.0，30.0μg/mL的系列溶液。 * * 实验步骤 (2）除去干扰的氨基酸： 向提取液中加入约0.4g的人造沸石和0.2g活性碳，强烈振荡5分钟，过滤，滤液备用。 （3）脯氨酸含量的测定： 分别吸取上述提取液2mL于刻度试管中，再取一支刻度试管，加入2mL 80%乙醇作为参比，分别向上述各试管中加入2mL冰醋酸和2mL茚三酮试剂，沸水浴中加热15分钟，冷却后在分光光度计测520nm处各样品的光密度，从标准曲线上查出每毫升被测样品液中脯氨酸的含量 2．样品中脯氨酸的提取及测定: （1）提取脯氨酸：各取正常和干旱处理的绿豆苗的叶片0.3g，剪碎，加入适量80%乙醇，少量石英砂，于研钵中研磨成匀浆。匀浆液全部转移至10mL刻度试管中，用80%乙醇洗研钵，将洗液移入相应的刻度试管中，最后用80%乙醇定容至刻度，混匀，80℃水浴中提取20分钟。 * * 实验步骤 2、测定电导率R1，称重。 3、把烧杯连材料放进微波炉里中火煮5分钟，再称重，补去离子水至原重。 4、测定电导率R2。 5、计算相对电导率。 相对电导率的测定 1、称取正常和干旱处理的绿豆苗的胚轴各1.0g，先用自来水冲洗去除表面的污物，再用无离子水冲洗2次。用吸水纸吸去多余的水分。将材料切成1厘米长度的小段，放进加了20ml的去离子水的烧杯里面，室温下浸泡1h。 * *