植物愈伤组织诱导与植株再生培养体系建立.pptVIP

植物愈伤组织诱导与植株再生培养体系建立; 植物愈伤组织培养是植物生物技术的最基本的内容，无论是细胞培养，原生质体培养，植物培养和器官培养，一般都要经过愈伤组织培养这个过程。因此，愈伤组织在离体培养过程中占有重要的地位，其用途也十分广泛，最直接和最重要的用途包括：1·无性繁殖并不大量扩繁被拍样的植物;2·为细胞悬浮培养和此生代谢产物生产和利用、原生质体培养和细胞融合提供易于操作的起始材料；3·为植物体细胞无性系变异、细胞突变体筛选创造适宜的体系和基础；4·为外源基因的遗传转化提供便于保存和利用的操作对象；5·为种质资源的保存提供新的形式；6·为离体研究植物组织和细胞分裂、分化、带鞋和状态的转变创造适宜的材料和体系。 植物再生：植物体因受伤或生理上分离而失掉组织或器官后，恢复或复制失去部分的现象。再生现象广泛存于植物中。植物的组织，甚至单个细胞都具有再生能力。在植物组织中，尤以分生组织的再生能力更为明显。 ;小麦愈伤组织诱导与其再生培养体系的建立;一、目的及意义 我国小麦目前的状况有以下几点：1 我国是农业大国，小麦面积4亿亩、产量9000万吨左右，分别占世界总量的 12%和18%，均居世界第一位。2 我国春小麦主要分布在东北、西北及华北北部。 据中国粮油信息中心的数据显示，预计中国 03/04市场年度（7月至次年6月）春小麦播种面积仅为190万公顷，较上年度减少5％，这是多年来中国春小麦种植面积首次低于200万公顷；预计03/04年度春小麦产量为580万吨，较02/03年度下降7.48%。我国的小麦种植面积不断的减小，总产量也在不断减少。由于我国目前存在的状况，农业大国，主产小麦，但小麦的产量的质量都不是很好，种植面积又在减少，本研究主要是能在农业上找到提高小麦的产量和质量的方法。;二、植物概述 小麦：小麦属于禾本科植物，麦粒在植物学上称为颖果，在种子学上则称为种子，通常称为小麦。麦粒皮色有红白之分，红皮的叫红麦，白皮的叫白麦。由于品种和受环境影响不同，红皮小麦又有深红色和红褐色；白皮小麦又有白色、乳白色或黄白色之分。 愈伤组织???在自然界中经常看见一些植物，尤其是树干的树干，收到机械创伤后由其韧皮部附近的细胞分裂形成的突起的“疤”，“瘤”就是愈伤组织。 胚状体：在植物细胞、组织或器官体外培养过程中，由一个或一些体细胞经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。可进一步发育成植株。;三、实验 3·1 材料及仪器 超净工作台、恒温培养室、高温灭菌器、胚钩和放大镜、直径9cm的培养皿、50ml与500ml(或250ml)三角瓶、50ml与500ml烧杯、酒精灯、枪形镊子； 按照培养基要求准备药瓶、材料表面消毒剂：70%乙醇和0·1%HgCl2、无菌水； 小麦未成熟或成熟种子;3·2 灭菌处理 1、小麦未成熟胚愈伤组织 取小麦受精后15~20天未成熟籽粒，用自来水洗净，在超净工作台上用70%乙醇浸泡30s，弃掉70%乙醇，用无菌水冲洗3次，在用0·1%HgCl2灭菌8min，弃掉0·1%HgCl2，用无菌水反复冲洗5~6次后备用 2、 小麦成熟胚愈伤组织 取小麦成熟种子，用自来水清洗干净后放在50ml烧杯中，加入温水浸泡种子，并将烧杯置于25。c~28。c的恒温培养箱中12~16h。然后取出用干净温水冲洗3~5次，在超净工作台上用70%乙醇浸泡30s，弃掉70%乙醇，用无菌水冲洗3次，再用0·1%HgCl2灭菌8分钟，弃0·1%HgCl2，用无菌水反复冲洗5~6次后备用。 ;;3·3 小麦愈伤组织诱导与培养 1·小麦未成熟胚愈伤组织诱导与培养 在超净工作台上，用灭菌的胚钩在灭菌的培养皿内将胚取出（如果很难取出幼胚，可以在放大镜下操作），然后用无菌镊子将其置于灭菌的诱导愈伤组织固体培养基上（含有2,2-Dmg/L和KT0·5mg/L，蔗糖浓度为3%，pH为5·8）。 将培养瓶用封口纸包好，放在25。c的培养室内培养。一般笑暗培养5~7天，然后再正常光照下诱导培养。光照与正常组织培养要求的光照想通，光照长度8~10h/d。 接种后，如果发现有芽形成，可以在超净工作台上用灭菌见到将芽去掉后，再将胚接种于诱导愈伤组织培养基上，继续进行诱导培养。 在愈伤组织诱导培养的过程中，要及时对愈伤组织进行继代培养。 将一部分愈伤组织转移到配制好的分化培养基上或继续在原来诱导愈伤组织培养基上，诱导植物再生。; 2·小麦成熟胚愈伤组织诱导与培养 在超净工作台上，用灭菌的胚钩在灭菌的培养皿内将胚取出（如果很难取出幼胚，可以在放大镜下操作），然