军事毒理 第五讲 毒理学的研究方法.pptVIP

第五讲 毒物评价的 常用方法 毒理学教研室 对毒物毒性的评价在毒理学上是一个重要的任务，对毒物进行评价的方法很多。根据毒性的性质，可分为一般毒性的评价和特殊毒性的评价，对一般毒性又可分为急性毒性、慢性毒性和蓄积毒性。特殊毒性主要有致突变、致癌和致畸的评价。 这是化学物毒理学危险度评价的基础，对防治毒物的急、慢性中毒，制订卫生标准等方面具有十分重要的意义。 一、一般毒性实验研究 1.急性毒性实验 急性毒性作用：是指机体一次或24h之内多次接触毒物之后，在短期内所发生的毒性效应，包括引起死亡效应。 注意：所谓“一次或24内多次”接触或染毒的时间界定：一次是指瞬间染毒，如经口染毒、经注射途径染毒， “短期内”，一般限定为7天之内。 急性毒性试验的目的： （1） 主要是探求化学物的致死剂量，主要是LD50。 （2）观察动物的中毒表现，初步评估其对人类的可能毒害的危险性。 （3）寻求该毒物的剂量－反应关系 （4）为其它毒性实验剂量设计和观察指标选择提供依据。 急性毒性实验设计 （1）实验动物的选择： 毒理学研究毒物的基础毒性主要是进行体内试验，即动物实验。实验最终目的是将毒物的毒性向人类外推。因此在动物的选择上。 遵循原则：尽量选择急性毒性反应与人近似的动物，易于饲养管理、试验操作方便，繁殖力强，数量较大能够保障供应，价格较低，易于获得的动物。常选用大白鼠和小白鼠。一般不同的实验对动物的物种、品系、年龄、体重、数量等方面都有一定的要求。 （2）染毒途径选择： 经口染毒：包括灌胃、喂饲和吞咽胶囊。 经皮肤染毒：一般液态、气态和粉尘状外源化学物通过接触皮肤染毒。 经呼吸道染毒：一是动物自行吸收，包括静式吸入染毒和动式吸入染毒。 二是人工动物气管注入，直接将液态或固态外源化学物注入肺内。 其他途径：静脉注射、腹腔注射、肌肉注射和皮下注射等。 大白鼠捉拿 小白鼠灌胃 （3）剂量选择与分组 ： 剂量选择是急性毒性实验成功的基础。一种方法是根据毒物的化学结构、理化性质等资料，查阅文献，寻找相同的毒物资料，作为参考。 另一种方法是先用少量动物，以较大的剂量间隔染毒，找出10％～90％的致死剂量范围。然后根据实验设计采用的LD50计算方法，进行剂量选择和分组。 分组按随机化原则进行。 （4）毒性作用观察： 观察指标还包括动物的一般情况，包括中毒的症状，体重、死亡的时间等。另一方面作相关的病理和生化指标的检查。 急性毒性分级 为了粗略表示外源化学物急性毒性的强弱和其对人的潜在危害程度，国际上提出了外源化学物的急性毒性分级，但分级标准并未完全统一。我国除参考国际上几种分级标准之外，也制定了自己的农药、食品、工业毒物的分级标准。 表－1 食品安全性评价的急性毒性分级 2.慢性毒性： 指实验动物或人长期（甚至终身）反复接触外源化学物后，所产生的毒性效应，亦称长期毒性试验。所谓长期一般指2年。各种试验动物寿命长短不同 ，对大鼠相当于终身染毒，对兔相当于生命的36％，对犬为20％，猴子为13％。 （1）慢性毒性实验目的 1.在急性毒性的基础上，进一步观察受试物对机体的主要毒性作用及毒作用的靶器官。 2.确定最大无作用剂量及中毒阈剂量。 3.为毒性机制研究提供参考。 慢性毒性实验设计 其在动物的选择、染毒途径与急性毒性实验设计原则相似，在实验周期上较长，观察指标更多、更加详细。剂量分组，一般设三个染毒组和一个对照组，剂量设计一般根据急性毒性的LD50来确定。 3.毒物的蓄积毒性 蓄积作用：当化学物反复多次染毒动物，而且化学物进入机体的速度超过代谢转化的速度与排出机体的速度时，化学物或其代谢产物就可能在机体内逐渐增加并贮留在某些部位。 蓄积毒性：由蓄积作用致使机体出现的中毒作用称为蓄积毒性。可分为物质性蓄积毒性和功能性蓄积毒性。 蓄积毒性实验 （1）蓄积系数法 蓄积系数法是一种以生物效应为指标，用经验系数评价蓄积作用的方法，这种方法简便，但不能区分化学毒物的物质性蓄积与功能性蓄积的差别。 蓄积系数是指多次染毒使半数动物出现毒性效应的蓄积剂量(ED50（n）)与一次染毒使半数动物出现相同效应的效量（ED50（1））之比值。