现代酶工程-2 酶发酵生产 .pptVIP

生产工艺 —— 工艺控制 pH值的影响及控制 —— 酶生产的合适pH 通常和酶反应的最适pH值相接近。生成碱性蛋白酶的芽孢杆菌宜在碱性环境下培养；生产酸性蛋白酶的青霉和根霉应在酸性环境下培养。 温度控制 —— 为了有利于菌体生长和酶的合成，可进行变温生产。例如枯草杆菌AS1.398进行中性蛋白酶生产时，培养温度从31oC逐渐升温至40oC，然后再降温至31oC进行培养，产量提高66%。 重组E. coli一般先37?C培养，加诱导剂后28?C产酶。 * 生产工艺 —— 工艺控制 生长期与产酶的关系 —— 微生物生长期与产酶有一定的关系，因菌种而异常。如曲霉的蛋白酶当菌体生长进入对数生长期时大量分泌；芽孢杆菌的碱性蛋白酶在对数生长期末大量形成芽孢时才生成。 通气搅拌的影响 —— 酶生产所用的菌种一般都是需氧微生物，培养时都需要通气搅拌。一般，通气量少对霉菌的孢子萌发和菌丝生长有利，对酶生产不利。因此必须根据不同的需要控制不同时期的通气量。 * 生产工艺 —— 提取 发酵液预处理 酶的沉淀或吸附 （盐析法、有机溶剂沉淀法或白土或活性氧化铝吸附） 干 燥 （收集沉淀进行干燥磨粉，加入适当的稳定剂、填充剂等制成酶制剂；或在酶液中直接加入适当的稳定剂、填充剂，直接进行喷雾干燥） 酶的提取： * 酶制剂产品 液体酶 固体酶 * 生产工艺—造粒 酶粒是在大型连续运转的水平混合机内生产出来的。提取的酶与盐、纤维素及其他成分混合形成0.5mm大小的粒状物。然后用一种聚合体包裹，以防止酶尘在使用过程中可能引起的致敏危险。 造粒对顾客及包含酶的最终产品来说，都是一种非常有效和安全的运输固态酶的方式。 用多聚体包裹酶以减少酶尘引起的致敏危险。 * 生产工艺—生产废渣处理 生产废渣实际上是有益于环境的。可被用做当地农田的肥料。 确保所有的微生物均经灭活之后才能从生产车间中运出。将含硅藻土、培养基和微生物的发酵液经加热及用碳酸钙进行处理。处理后的发酵液废渣最终为可持续性工业解决方案做出了贡献。 即使是生产废渣也是有用的；它们可以用作肥料。 将生产废渣用做肥料 * 生产工艺-中性蛋白酶工艺流程 * 提高酶产量的方法 酶合成的调节机制：在正常情况下，酶产量受酶合成调节机制的控制，要提高酶产量必须打破这种调节控制。酶合成主要取决于转录水平的调节，原核生物中普遍公认的调节机制是操纵子理论。 * * 第二章 酶的发酵生产 * 酶的发酵生产 第一节 酶生物合成的基本理论 第二节 酶发酵生产常用的微生物 第三节 发酵工艺条件及控制 第四节 酶发酵动力学 第五节 动植物细胞培养生产酶 * 第一节 酶生物合成的基本理论 一、RNA的生物合成——转录 二、蛋白质的生物合成——翻译 三、酶生物合成的调节 * 一、RNA的生物合成—转录 转录是以DNA为模板，以核苷三磷酸为底物，在RNA聚合酶（转录酶）的作用下，生成RNA的过程。 转录速度表达式? * 二、蛋白质的生物合成—翻译 翻译：以mRNA为模板，以氨基酸为底物，在核糖体上通过各种tRNA，酶和辅助因子的作用，合成多肽的过程。 四个阶段 1、氨基酸活化生成氨酰－tRNA 2、肽链合成的起始 3、肽链的延伸 4、肽链合成的终止 思考:密码子偏爱性与翻译速率? * 第二节 酶发酵生产常用的微生物（酶的生产菌种） 一、产酶菌种的要求 二、常用的产酶微生物 三、利用微生物产酶的优点 四、高纯菌种的获取 * 一、产酶菌种的要求 1、发酵周期短，产量高； 2、容易培养和管理； 3、产酶稳定性好，不易变异退化，不易被感染； 4、有利于酶的分离和纯化； 5、安全性可靠，非致病菌。 * 二、常用的产酶微生物 1、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 2、大肠杆菌(Escherichia coli) 3、黑曲霉(Aspergillus niger) 4、米曲霉(Aspergillus oryzae) 5、青霉(Penicillium) 6、木霉(Trichoderma) 7、根霉(Rhizopus) 8、毛霉(Mucor) 9、链霉菌(Streptomyces) 10、啤酒酵母(Saccharomyces Cerevisiae) 11、假丝酵母(Candida) * 微生物发酵法 微生物 酶 ①微生物种类繁多，制备出 的酶种类齐全，几乎所有的 酶都能从微生物中得到 ②微生物繁殖快、生产周期 短、培养简便，并可以通过 控制培养条件来提高酶的产量 ③微生物具有较强的适应性和 应变能力，可以通过适应、诱 导、诱变以及基因工程等方法 培育出新的产酶高的菌株 优点 商品酶的主要生产方法 * 微生物发酵法 高产 优良 菌株 培养 和 繁殖 代谢 和 积