葡萄糖苷酶水解对辽东楤木嫩芽皂苷理化性质的影响.docx

β-葡萄糖苷酶水解对辽东楤木嫩芽皂苷理化性质的影响*颜廷才，张旋，斯琴，孟宪军( 沈阳农业大学 食品学院，辽宁 沈阳，110161)摘要以实验室制备的本溪产辽东楤木嫩芽皂苷为试验材料，探索了β-葡萄糖苷酶酶解对辽东楤木嫩芽皂 苷基本理化性质的影响。结果表明:经过β-葡萄糖苷酶酶解后辽东楤木嫩芽皂苷黏度明显减小，颜色变为浅黄色，溶解度增大，挥发程度提高，刺激气味变强烈，甜味降低。经过硅胶柱分离的样品组分的质量比例与齐墩果酸含量比例也发生变化，齐墩果酸含量由原来的33.5%升高至37.2%。随着皂苷溶液浓度的增大其清除羟基 自由基与氧自由基的能力逐渐增强，β-葡萄糖苷酶酶解可显著提高皂苷自由基的清除效果。β-葡萄糖苷酶酶解 后辽东楤木嫩芽总皂苷吸收峰明显减少，紫外吸收明显向低波长靠近，最大的吸收峰由299nm降低到236nm。 红外图谱表明:酶解后增加了脂肪族伯胺、脂肪族仲醇、脂肪族羧酸、不饱和脂肪酸脂;经详细图谱检索，说明β- 葡萄糖苷酶水解掉部分葡萄糖，裸露出了β-D-半乳糖、苯基葡萄糖苷、羧基与长的碳链。这说明β-葡萄糖苷酶水解掉部分单糖，使皂苷单体分子明显变小，单体数量减少，改变其物理化学特性，提高其清除自由基能力，这为提高辽东楤木嫩芽总皂苷活性提供参考。关键词辽东楤木嫩芽，皂苷，β-葡萄糖苷酶，水解，自由基辽东楤木(Araliaelata(Miq)Seem)属于五加科楤木属植物，又名龙牙楤木、刺嫩芽、树龙牙等，主要分布在我国东北部，俄罗斯、日本、朝鲜等地。辽东楤木嫩芽营养丰富、口感好，属山野菜中之珍品，号称“天下第一山珍”［1］。辽东楤木嫩芽还含有较高的皂苷、醛类物质、生物碱、挥发油、胆碱、香豆精、鞣质、豆 甾醇及β-谷甾醇等药用成分，有消炎、利尿、强心、免 疫和防癌等医疗保健作用［2－3］。由于皂苷的药效广 泛而且显著，近年来皂苷成为有机化学、天然产物化学、生物医学的研究热点［4］。辽东楤木嫩芽总皂苷 的含量大约是人参皂苷含量的3倍，含量虽然高，但活性比人参皂苷小，并且辽东楤木嫩芽皂苷种类繁多，具体是哪一组分活性更高，目前没有研究，这限制了辽东楤木嫩芽皂苷的应用［5］。目前辽东楤木嫩芽 皂苷研究方向主要集中在辽东楤木嫩芽新皂苷种类的发现上，而对于辽东楤木嫩芽皂苷活性改进方面未见到相关报道。相关研究表明:β-葡萄糖苷酶等水解人参皂苷得到高抗癌活性的皂苷单体［6］，酸催化水解法、乙酞解法、降解水解法、光解法、碱裂解法和酶水解法等［7］也可以提高皂苷活性，这为提高辽东楤木嫩芽皂苷生物活性提供了理论依据与方向。本研究旨在通过β-葡萄糖苷酶水解辽东楤木嫩芽皂苷原第一作者:博士，副教授(孟宪军教授为通讯作者，E-mail:mengxjsy@126．com)。* 辽宁省博士启动基金项目收稿日期:2013－05－24，改回日期:2013－09－13料，探索 β-葡萄糖苷酶水解后皂苷基本理化性质的变化，并采用红外与紫外检测来证实皂苷分子变化，希望找到提高辽东楤木嫩芽皂苷生物活性的方法，为扩大辽东楤木嫩芽皂苷应用提供一定基础。1材料与方法1.1材料与试剂辽东楤木嫩芽皂苷粗品，由本实验室自制;齐墩果酸对照品( 批号: 110709-200304，供定性分析和含量测定用)，中国药品生物制品检定所;层析用硅胶，国药集团化学试剂有限公司; β-葡萄糖苷酶为分析纯，Sigma 公司; 甲醇为分析醇、乙腈为色谱纯，Sigma公司; 娃哈哈饮用纯净水。1.2仪器SBA—100数控计滴自动收集器，青浦沪西仪器厂;玻璃层析柱，华美试验仪器厂;ＲE—52型旋转蒸发仪，博通仪器厂;HL—2S恒流泵，青浦沪西仪器厂;DEF真空干燥箱，上海精宏试验设备有限公司;KQ-100DB型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司;FT-IＲ200型傅立叶变换红外光谱仪，THEＲMO公 司;TDL-5000B型离心机，安亭仪器厂;微量进样器(25μL)，安亭微量进样器厂;UNICUV-4802H紫外可见分光光度计，上海分析仪器厂; FA2004电子天平，上海精密科学仪器有限公司。1.3方法1.3.1硅胶柱分离辽东楤木嫩芽皂苷组分样品胶制备: 称取经过纯化的β-葡萄糖苷酶酶解前后辽东楤木嫩芽皂苷样品各500mg和4g过60～100目筛的硅胶，分别放入研钵中研磨，倒入5mL( 3) OH·清除率的测定: 在( 1)的体系中加入清除剂，按( 2) 的方法测定吸光度 AS，按下式计算:A0 －AS甲醇搅拌，辽东楤木嫩芽皂苷被硅胶吸附。清除率/%=A0－×100湿法装柱:使用前硅胶G于110℃活化1h。先1.3.4对O2·自由基的清除作用用一小块脱脂棉堵住柱底，将30g过 200～300目筛的硅胶在甲醇溶剂中充分溶胀后除去气泡，将硅胶的糊状物慢慢陆续不