斑马鱼补体调节因子RCA group 2基因簇与CD59基因的鉴定、表达和功能研究汇总.pdf

2$BI#与(聊#Ⅲ∞鼯2＆4Ⅻn自}ⅫR Ⅸ日±#Ⅷ’，目，Rc^group 斑马鱼补体调节因子RCA 2基因簇与cD卯基因的鉴 group 定、表达和功能研究 摘要 补体是先天性免疫系统重要的组成部分，它的激活受体内一系列补体调节因 子精密的调控，咀防补体的过度激活埘机体细胞造成损伤，同时也避免补体成分 的浪费。补体的调控主要集中在c3转化酶的形成、稳定和攻膜复台体形成的关 键步骤上。在人中，调节c3转化酶的补体调节因子的基因都紧密连锁在1号染 色体的长臂上(1q32)，称为补体激活调节因子RCA基因簇，这个基因簇可以分 2：而调节攻膜复合体形成的关键补体调节因子是CD59。虽 为group1和group 1基因簇的相关报道，而其他的补体调节因子尚 近在斑马鱼中己经有RCAgroup 2基 无报道。为了完善对斑马鱼补体调节机制的了解，本文对斑马鱼RCAgroup 2基因簇的两个 园簇和CD59基因开展了研究。我们发现并克隆出了RCA group 基因(ZRCI和ZRC2)和CD59基因，它们具有与高等动物相关基因相似的基因 和蛋白特征，且它们呈母源性表达，尤其是ZRCI，可能在胚胎发育的早期通过 母源传递来起保护作用。 斑马鱼RCA 7Mkb处，这与蛙、鸡和人的RCA 因紧密连锁，而位于pFKFB2基因下游I group 2基因相对于PFKFB2基因的方向和斑马 2基因簇稍有不同。但是，RCAgroup 鱼RCA 2基因编码蛋白的顺序与蛙，鸡和人的相一致。ZRCl和ZRC2彼 group 此之间具有711％的一致性，说明它们是在鱼类从与哺乳动物共同的祖先中分化 出来之后通过基因复制产生的。ZRCl和朋印分别编码一个l型膜蛋白和可溶 性蛋白，两者具有不同的表达谱，这说明它们可能已经发生了功能性的分化。此 外，LPS能够显著的上调zRc2基因的表达，说明zR∞可能与急性时相反应有 关。 斑马鱼CD59基因所编码的蛋白由N一端25个氨基酸组成的信号肚、c一端21 个氧基酸组成的GPI锚定区域和中问的LU结构域组成。成熟的斑马鱼CD59蛋 白具有保守的10个半胱氨酸残基，使得斑马鱼CD59具有与人CD59相似的三 维结构，对功能的埕挥非常重要。唯一与哺乳动物不同的是斑马鱼CD59它’没有 m9鱼朴体调∞目子RCAgroup2幕月薜#删g目∞鉴定、表达Ⅻ功＆R N．糖基化位点，这与其他鱼类CD59情况一致，推测N一糖基化修饰对硬骨鱼CD59 功能的发挥nJ能并怍必须的。直线同源分析显示斑马鱼CD59基因与FBX03基 因紧密连锁，且细胞定位分析显示斑马鱼67)59基因编码的蛋白主要以膜蛋白的 形式在细胞膜J：表达，这些都与再他高等物种相似。不过与高等动物不同的是， 斑马鱼CD59在mRNA水平和蛋白水平在脑中表达量都异常的高。我们还拉现 体外表达的斑马鱼CD59能够识别细菌并在浓度高时具有一定的杀菌作用，表明 除了具有经典的补体调节功能外，CD59可能还可咀通过对病原苗的识别及直接 杀菌作用而对鱼类重要的器官脑的保护起重要作用。 总而言之，本文第一次报道了斑马鱼RCA 2基因簇和终米裂解途径的 group 补体调节蛋白的存在，表明鱼类具有一套较为完整的补体调节系统，为人们理解 低等物种的防御机制提供了新的信息。 关键词：斑马鱼，补体，RCA 2基因簇，CD59 group Ⅸ马鱼朴#*∞目f 2#Ig麟’oCD59