斑马鱼补体调节因子CFI基因的鉴定、功能初探及CFH家族成员的急相反应汇总.pdf

斑马鱼补体调节因子CF!基因的鉴定、功能初探及CFH家族 成员的急相反应 补体调节因子J(CFI)是哺乳动物补体系统的重要组成成分，发挥着免疫 调节补体系统的过度激活。已有研究表明哺乳动物中CFI有重要作用．且与疾病 发生相关，但CFI在其它物种中研究较少。斑马鱼作为一种重要的模式动物，其 基因组测序已经完成，与人类基因的保守性高达95％，这使得斑马鱼适于研究基 因的表达与功能。本论文成功从斑马鱼中克隆了补体因子CFI．并分析了其特征、 表达，对功能进行了初步探索，同时对CFI的辅因子CFH在胚胎发育中的表达 模式及其对LPS和LTA感染的应答进行了分析。 斑马鱼CFI 基酸的蛋白质，多肽链的分子量为81 17。与其它脊椎动物 4kDa，等电点pl为6 CFI蛋白的同源比对结果显示序列相似性高达355％．67 1％，且序列中存在大量 保守的半胱氨酸。CFI蛋白具有段由18个氨基酸组成的信号肤和5个保守域， 间还有一段特异性的序列，这段序列可能是鱼类所特有的。成熟的CFI是由重链 构域组成轻链，在轻链中存在保守的催化三联体His．Asp-Set和一个位子催化部 位底部的Asp残基。作为一种分泌型糖蛋白，斑马鱼的CFI序列中舍有O．糖基 化位点和N．糖基化位点，O糖基化位点主要位于信号肽和F1MAC结构域之间的 特异性序列区域．N-糖基化位点则分散存在于整个CFI序列之中。蛋白结构预 测显示斑马鱼CFI蛋白同人CFI蛋白的空问结构具有很高的相似性，这预示它 们功能上的相似性。进化分析显示，CFI蛋白在进化上高度保守，哺乳动物CFI 基嗣聚为一枝．斑马鱼与硬骨鱼的CFI蛋白聚为一枝。LDLrl结构域和LDLr2 结构域的进化树中两个结构域各裳为。簇，在每一个结构域的分枝中表现出与 CFI蛋白全瞄赴化树相同的聚类趋势。实时定量PCR检测结果显示斑马鱼CFI 基因在并组织tJ，J“泛表达，其中在卵巢、精巢、肝脏、脑、肠和眼中的表达量很 高。当受到LPS蟮染时，甜7在肝脏中的表达最r调。CFI堆嗤l和CFH家族基 冈在不同发育时期胚胎中具有不J司的表达模式，(蜒因在胚胎发肯的体节期表 达量揖多，而大部分(仰家族成员在】dpf腓胎巾表达量开始显著增多，其中 CFHL4在胚胎发育整个过程中部具有很高的表达量。在体节期，当胚胎受到LPS 和LTA感染时．CFI基因的表达量显著F喘，而(1刖家族基蹦在胚胎发育不同 对期则呈现不同的应苔趋势，且表达量变化显著。推测CFH家族基因在斑马鱼 胚胎发育过程巾，通过多种形式对朴体选径进行若精确的调控。胚胎整体原位杂 交结果显示，CFl基因在胚胎发育的过程中在卵黄合胞体上～直具有特异性表 达，在体节期时信号最强。当胚胎发育至1天对．CFI基因在松果体中也出现特 异性表达。这提示CFI除了参与朴体调节外，可能在早期发育过程中也起重要 作用。初步实验表明过表达CFlmRNA并没有可见的对胚胎发育的影响。同时， 2kDa．这为进 还尝试了原核表达C兀，体外诱导表达重组蛋白CFI的大小为64 ～步在蛋白水平研究斑马鱼CFI的功能奠定了基础。 关键词：斑马鱼：补体调节；CFI；CFH Characterization andfunctionalofthe analysiscomplement factor1 and acute ofCFH membersin response phase family zebrafish Abstract The invertebratesacrucialroleintheeliminationof complementsystem