酶辅助超声波法提取连翘叶总黄酮工艺.doc

酶辅助超声波法提取连翘叶总黄酮工艺 第33卷第1期 2012年2月 河南科技大学:自然科学版 JournalofHenanUniversityofScienceandTechnology:NaturalScience Vol33Nol Feb.2012 文章编号:1672—6871(2012)O1—0096—04 酶辅助超声波法提取连翘叶总黄酮工艺 吴艳芳,王新胜,尹延彦,陈蓉,李方方 (1.新乡医学院药学院,河南新乡453003;2.河南科技大学化工与制药学院,河南洛阳471003;3.南京中医药太学药 学院,江苏南京210046) 摘要:采用酶辅助超声波法提取连翘叶总黄酮,在超声波条件固定的情况下,研究了酶解时间酶解液PH傅 酶解温度和酶用量对连翘叶总黄酮的影响.获得的优化条件为:酶解时间1.5h,酶解温度40℃,酶量 3mg/g,最适pH值为5.0.在此条件下测定的连翘叶总黄酮含量为(26.53妻068)%.试验结果表明:酶辅 助超声波法提取连翘叶总黄酮是一种行之有效的方法. 关键词:酶法;超声提取;连翘叶;总黄酮 中图分类号:R284.2文献标志码:A 0前言 连翘叶是木犀科植物连翘的干燥叶,在中国民间药用已有较长历史,在河北,陕西等地有将连翘叶 制成茶作为保健饮料饮用的习惯.现代药理实验研究证明I3:连翘叶的沸水粗提取物具有明显的抗 氧化,抗衰老作用,而黄酮是其抗氧化作用的主要成分之一. 近年来,不少学者对连翘叶中总黄酮类物质的提取技术进行了多方面积极和有益的探索.超 声波提取法是一种新型的中药有效成分的提取方法,酶法也逐渐作为提取生物活性成分的新兴技 术得到了广泛的应用-9.目前,已有不少关于酶法与超声波联用提取中药有效成分的报道¨”].虽 然不同学者研究所选的原料不同,但得出的结果比较一致,即酶解预处理能明最提高植物药有效成分的 提取率,超声波也可以明显提高提取效率.因此,本试验研究酶辅助超声法提取连翘叶总黄酮,通过单 因素和正交试验分析确定最佳提取条件,为连翘叶总黄酮的进一步开发利用提供技术参考. 1原料,仪器与试剂 连翘叶采集于河南省栾川县,经新乡医学院中药鉴定教研室鉴定为木犀科植物连翘的叶,连翘叶标 本存放于新乡医学院药学院中药标本馆.将连翘叶阴干,粉碎,备用. 采用的仪器为:752N型紫外可见分光光度计;KQ3200B型超声清洗仪;电子天平I电恒漏水浴锅; 离心机. 试剂为:纤维素酶,购于上海蓝季科技发展有限公司;芦丁对照品,购于中国药品生物制品检定所 (批号:100080—200707);无水乙醇,冰醋酸,A1C1,,三水合醋酸钠,NaOH和HC1均为分析纯. 2试验方法 2.1试验工艺流程 连翘叶粉碎一过40目筛一称量加酶一温浸一高温灭活一超声提取一离心一取上清液稀释一测 量吸光光度. 2.2检测波长的选择 取适量的对照品溶液和提取溶液,加体积分数为1%的A1C1,显色剂,于250长内每隔5 nm测定一个波长,确定检测波长. 基金项目:河南省科技刨新杰出青年基金项目(104100510016);新乡医学院省级重点学科开发项目(ZD200968) 作者简介:吴艳芳(1977一),女,河南修武人,讲师,硕士,研究方向为生药鉴定及品质评价. 收稿日期:2011—09—06 第1期吴艳芳等:酶辅助超声波法提取连翘叶总黄酮工艺?97? 2.3标准曲线的绘制 标准溶液的配制:精确称取芦丁对照品0.039g,置250mL容量瓶中,加体积分数为60%的乙醇溶 液溶解,摇匀,定容得浓度为0.156mg/mL的对照品溶液.分别精密吸取0mL,0.50mL,0.75mL,1.00 mL,1.25mL和1.50mL上述对照品溶液于10mL容量瓶中,分别加体积分数为1%的A1C1最示剂1 mL,用体积分数为60%的乙醇溶液定容.以0mL对照品溶液为空白对照,在4l0nm处分别测定其吸 光度,以吸光度为横坐标,浓度为纵坐标,得标准曲线c:9.o32S4_}=0:0,003,r三0:9997. 2.4单因素试验 精密称取0.500g连翘叶粉末,在提取温度,酶用晕酶解时间一鏖的条件下,分别加入pH值4.5, 5.0,5.5,6.0,6.5的缓冲溶液浸提连翘叶总黄酮,考察不同pH对总黄酮提取的影响. 在缓冲溶液,酶用量,酶解时间一定的条件下,分别在35℃,40℃,45℃,50℃,55℃下浸提连翘叶 总黄酮,考察不同提取温度对总黄酮提取的影响. 在缓冲溶液,温度,酶解时间一定的条件下,加酶量分别为1mg/g,2mg錾,3mgg,4mg/g,5mg/g, 浸提连翘叶总黄酮,考察酶用量对总黄酮提取的影响. 在缓冲溶液,温度,酶用量一定的条件下,表1国素水平表 分别酶解1.0h,1.5h,2.0h,2.5h,3.0h,考