黄斑蓝子鱼LXRα基因的克隆及环境盐度对其mRNA表达水平汇总.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 肝脏X 受体(Liver X Receptors, LXRs)是细胞核受体超家族的成员之一，与脂质代谢有 关，对脂肪酸的合成、胆固醇的输出、胆汁酸的产生以及几种脂质转运蛋白均有调控作用， 在维持机体脂质的动态平衡中发挥作用。LXRs 在哺乳类中有 LXRα 、LXRβ 两种类型， 两者具有77% 的同源性，并具有相同的同源配体；LXRα 主要分布在肝、肠、肾上腺、脂 肪组织等脂质代谢旺盛的组织中，LXRβ 广泛分布于各组织中。研究者认为LXRβ 基因在 鱼体中由于进化而缺失。 高度不饱和脂肪酸(HUFA)具有维持细胞膜结构和机能的完整性，保持某些酶活性， 构成前列腺素前体及增强免疫系统等功能。一般认为，淡水硬骨鱼类可以通过脂肪酸的去 饱和及碳链延长作用将亚油酸和 α-亚麻酸转化为 HUFA ，而海水鱼的这种能力缺乏或很 弱。最近，本课题组在黄斑蓝子鱼(Siganus canaliculatus) 中首次发现和证明海水鱼具有这 种能力，且该种转化能力与鱼体生活的环境盐度有关。为了进一步研究鱼类 HUFA 合成 代谢的调控机制，寻找提高鱼类内源性HUFA 合成能力的方法，本文克隆了蓝子鱼的LXR 基因，并研究其组织表达特性，对不同环境盐度下的mRNA 表达水平与组织脂肪酸组成 等进行比较研究，以探讨LXR 在HUFA 生物合成调控中的可能作用。主要结果如下： 1. 采用RT-PCR 和RACE 方法获得黄斑蓝子鱼的LXRα 的全长cDNA 序列为3055bp， 包括5′非编码区407 bp ，3′非编码区1259 bp ；开放阅读框1389 bp，编码462 个氨基酸。 该LXRα 的氨基酸序列与草鱼、大西洋鲑、斑马鱼、人和家鼠的LXRα 分别具有85 ％、 84%、83%、64%、65%的相似性；蛋白序列具有哺乳动物LXR 的典型特征，包括DNA 结合区域(DNA-binding Domain, DBD)和配体结合区(Ligand-binding Domain, LBD) 。经蛋 白质结构分析，推测蓝子鱼LXRα 蛋白质的分子量为52385.8 D，蛋白N 端到C 端均存在 较强的亲水性，不含信号肽与跨膜结构。 2. 利用real time PCR 方法检测了黄斑蓝子鱼9 个组织中的LXRα 基因表达水平，结 果显示：LXRα 在心脏、肝脏、脾脏、鳃、肌肉、眼睛、肠、脑、脂肪等组织中都有表达。 其中在肠组织中的表达量最高，相对于其它组织差异显著(P0.05) ；其次为眼睛、肝脏组 织，在肌肉和脂肪组织的表达水平最低。这表明，肠、眼睛和肝脏组织可能是 LXRα 基 因参与蓝子鱼脂类代谢的主要部位。 3. 利用real time PCR 方法比较不同盐度下(10ppt 和32ppt)养殖的蓝子鱼肝脏、肠、眼 睛组织中LXRα 的mRNA 表达水平。结果显示，组织中LXRα 的mRNA 表达水平与鱼体 I 中文摘要 生活的环境盐度有关。肠组织中的表达水平是高盐度组明显高于低盐度组(P0.05) ；眼睛 和肝脏组织的表达水平是高盐度组略高于低盐度组。在肝脏和肌肉中脂肪酸成分测得结果 显示，高盐组鱼肌肉中的DHA 含量和n-3/n-6 PUFA 比值，以及肝脏中的n-3 和n-6 PUFA、 ARA 、DHA 、EPA 和DPA 含量、n-3/n-6 PUFA 比值等都显著高于低盐组鱼。肝脏作为脂 肪酸合成的重要器官，推测LXRα 在蓝子鱼肝脏脂类代谢中可能具有重要的生物学功能。 本研究是首次从植食性海水硬骨鱼类中克隆得到LXR 基因，也是首次从分子生物学 水平上研究鱼类LXR 基因转录表达与环境盐度的关系；LXR 基因在肠、眼睛、肝脏中的 高表达提示其可能参与这些组织的脂类代谢活动。不同盐度环境下 LXRα 基因表达水平 与组织脂肪酸组成存在一定相关性，提示LXR 可能在蓝子鱼HUFA 代谢调控中发挥重要 作用。研究结果可丰富鱼类营养学、特别是分子营养学内容，有助于深入开展鱼类HUFA 代谢调控机制研究，因而具有重要的理论意义和学术价值。 关键词：黄斑蓝子鱼; LXRα 基因；生物信息学；组织表达；环境盐度；脂类代谢