鸡卵黄高磷蛋白中和内毒素作用的研究汇总.pdfVIP

÷目坶洋大学日±{＆☆女 鸡卵黄高磷蛋白中和内毒素作用的研究 摘要 胞吸收酶解后的主要产物之，是一种富含磷酸化丝氨酸的具有掰亲性的卵黄蛋 白。研究表明，Pv具有螯台金属离子的作用、乳化眭、抗氧化性、抗凝血酶活性 和免疫作用等多种功能性质。本论文的目的是以鸡Pv为材料，研究其在免疫调节 方面的功能。 本论文第一部分对Pv的杀菌活性及机理进行研究。我们发现在500c时Pv对革 coil，E 兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichiacoli)和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球 菌(Staphylococcusaureus．s口删Ⅱ)的生长都有很强的抑制作用，但是370c下 Pv无显著的杀菌作用。将异硫氰酸荧光素(FITC)标记的Pv与各种细菌孵育后 用荧光显微镜观察发现Pv可以分别与Ecoli和sauYell$结合。通过酶联免疫吸附 molecular (1ipoteichoic 依赖性，表明Pv是一种多价的模式识别受体。这些结果说明和鱼类Pv一样，鸡 抗茵作用具有温度依赖性。 inflammatory responsesyndrome，SIRS)，常由外伤、手术咀及烧烫伤等引发， care 是目前重症监护(intensive units，ICU)病人高死亡率的主要原因，全球每 年因脓毒症死亡的病人高达100万以上．死忘率高达40％．60％。LPS又称内毒素 (endotoxin)，是脓毒症的主要诱发园子，其靶细胞为单核／巨噬细胞系统，通 过一系列的信号转导引发机体释放肿瘤坏死因子ct(tumernecrosisfactor-o．， 氮：．r^tricoxide．NO)等炎性因子，启动机体过度的、自我放大和皂我破坏性的 炎症反应。研究发现，许多蛋白或肽粪不仅具有抗菌作用，还具有免疫调节作用， 可以高亲和性地结台LPS并从源头上中和其毒性，从而降低对LPS诱导的TNF．q 等细胞因子的释放，降低脓毒症小鼠的死亡率．避免器官损伤。因此，在本文第 十目％#^学m￡学位论女 一部分发现Pv可以结台LPs的基础上，我们进行了鸡Pv中和内毒素作用的研究。 日前普遍认为1wF—a是LPS毒性段脓毒癌艋状的一个好的指示因子一因此，我们 7，通过EL1sA检测细胞上清的 首先用LPs和Pv等处理小鼠单核巨噬细胞RAw264 TNF—n的浓度来检测Pv对LPS毒眭的体外中和作用。我们发现Pv与LPS共同孵育 05)t这表明Pv 的细胞释放的TNF—o水平较LPS}U生理曲水麸孵育组降低(pO 在体外具有中和内毒索的作用。M丁丁检测和对红细胞的溶』舡括性检测表明，Pv 不具细胞毒性或溶血活性，因此接下来我iflSL进行了Pv中和内毒素作用的体内实 验。作为第一步，我们建立了昆明小鼠脓毒症模型，以便研究Pv对LPs毒性的体 内中和作用。通过腹腔注射不同剂量彬JLPS，晟终选取致死率达80％一100％的50 m眺g的LPs剂量用作建立模型。在Pv对脓毒症小鼠的保护作用实验中，每组18 只小鼠腹腔注射50mg／kgLPs后随即分别注射生理盐水或Pv等t发现Pv可延缓脓 毒症小鼠的死亡；模型对照组在16h．24h内达到死亡高峰，死亡8只，而实验组 小鼠在此时间段内仅死亡1只：10d内实验组小鼠的存活率较模型对照组有所提 h一64 05)。另外，通过 高．尤其在LPS注射后24 h期Ih]Pvfl々保护作用显著(po (p0叭)。以上结果表明，在体内Pv也具有中和内毒索的作用。我们的研究表 jjPv具有治疗脓毒症的潜能，可以用作对脓毒症的辅助治疗，鉴于Pv在鸡蛋中的 丰富含量以及鸡蛋的来源广范性，这在临床上将具有十分重要的意义。 关键词：卵黄高磷蛋白：杀菌作用；免疫调节：脂多糖：肿瘤坏死因子n 中国晦洋太{硬±学位论立 ofhen End