第7章 基因文库的构建.pptVIP

一、基因组文库的构建 外源基因组的获得及DNA大片段的制备 用于构建基因文库载体的制备 载体与外源DNA片段的连接 体外包装及基因组DNA文库的扩增 真核基因组DNA在λ噬菌体载体上构建基因组文库 基因组文库的大小 以质粒为载体构建cDNA文库示意图 以λ噬菌体作载体构建cDNA文库流程图 * * 基因库（gene pool）：特定生物体全基因组的集合（天然存在） 基因文库（gene library or gene bank）： 通过克隆方法保存在适当宿主(一般指细菌)中的某种生物、组织、器官或细胞类型的所有DNA片段而构成的克隆集合体。 根据构建对象的不同，基因文库分为： ●基因组文库 ●cDNA文库 用适当的方法将某一种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小合适的片段，并将这些片段与适当的载体进行体外重组；再引入到适当的宿主细胞中繁殖和扩增，从而形成含有重组DNA分子的群体。 从理论上讲，这些重组子包含有整个基因组DNA序列，即包含了该种生物的全部基因，故称之为基因组文库。 利用纯化的总mRNA在逆转录酶作用下合成互补的DNA即cDNA，再按上述构建基因文库的类似方法对cDNA片段进行克隆，由此获得的克隆群体，称之为cDNA文库。 基因组DNA的切割 用于基因组文库构建的DNA片段的切割一般采用超声波处理和限制性内切酶部分酶切两种方法，其目的是： ●保证D