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二甲基甲酰胺对V79 细胞的毒性作用研究 中文摘要 中文摘要 目的：二甲基甲酰胺( N, N-dimethylformamide, DMF )是一种低毒类的有机溶 剂，是一种重要的化工原料，目前广泛应用于有机合成、石油提炼等工业行业， 以及医药和其他行业。随着现代工业的发展，DMF 的应用范围不断扩大，职业接 触人员也不断增加，这给接触DMF 的作业人群带来了健康安全隐患。本研究通过 了解二甲基甲酰胺（DMF ）对中国仓鼠肺细胞（V79 细胞）的细胞毒性、DNA 损 伤作用以及细胞毒性机制，试图探讨二甲基甲酰胺可能的细胞损伤机制，为提出 有效的保护职业暴露人群健康的措施提供依据。 方法：（1）以体外培养V79 细胞为研究对象，采用四氮唑盐比色分析法（MTT 法）检测不同浓度的DMF 对V79 细胞作用不同时间段后，细胞存活率的变化，了 解浓度-时间-毒性效应关系；（2 ）采用碘化吡啶（PI )染色观察细胞周期分布状况， 了解DMF 对V79 细胞周期的影响；（3 ）用碱性单细胞凝胶电泳技术（SCGE ）检 测不同浓度 DMF 在作用不同时间段后，V79 细胞的 DNA 单链断裂的损伤情况。 （4 ）用中性单细胞凝胶电泳技术检测不同浓度 DMF 在作用不同时间段后，V79 细胞的DNA 双链断裂的情况；(5)用流式细胞术DCFH-DA 法检测不同浓度DMF 处理V79 细胞后活性氧（ROS ）含量比的变化。 结果：(1) MTT 结果显示，各组V79 细胞存活率随染毒浓度及染毒时间的增 加而下降，与阴性组比较差异均有统计学意义（P ＜0.05 ），存在明显的剂量-效应 关系（6h, β = -0.002，P ＜0.05; 12h, β = -0.003，P ＜0.05; 24h, β =- 0.003，P ＜0.05 ）。 (2) 流式细胞仪检测细胞周期发现，经DMF 作用24h 后V79 细胞周期发生了明显的 变化。每一染毒时间段内，随着DMF 染毒浓度的增加，G1 期细胞的构成比降低； 而S 期细胞和G2 期细胞的比例则随着DMF 浓度的升高而升高，各染毒组与阴性对 照组比较均有差异性，差异具有统计学意义 （P ＜0.05 ）。(3) 碱性单细胞凝胶电泳 结果显示，彗星拖尾率、尾长、Olive 尾距、尾部DNA 百分含量随着DMF 染毒浓 度的增加而增大，经SNK 方差分析，各染毒浓度组和同组阴性组比较，差异均有 统计学意义（P ＜0.05 ）。(4) 中性单细胞凝胶电泳结果显示，彗星拖尾率、尾长、 Olive 尾距、尾部DNA 百分含量随着DMF 染毒浓度的增加而增大，经SNK 方差 I 中文摘要 二甲基甲酰胺对V79 细胞的毒性作用研究 分析，各染毒浓度组和同组阴性组比较，差异均有统计学意义（P ＜0.05 ）。（5 ）经 流式细胞仪检测，随着DMF 染毒浓度的升高，活性氧（ROS ）含量相应增高并呈 线性相关关系。 结论：（1）DMF 能够明显抑制 V79 细胞增殖，存在正向的剂量-效应关系， 并能引起DNA 损伤。（2 ）DMF 染毒可以引起细胞周期阻滞，导致细胞凋亡。（3 ） 低浓度的DMF 0.5mmol/L 染毒6h 即可引起细胞单链断裂。（4 ）DMF 染毒后可造 成细胞双链断裂，导致DNA 损伤。（5 ）DMF 可引起V79 细胞内活性氧含量增加。 本次研究结果显示，DMF 可引起体外培养的V79 细胞存活率下降，通过引起DNA 单双链断裂导致细胞损伤，细胞内活性氧ROS 含量的增加可能是导致DNA 损伤 的一种机制。 关键词：二甲基甲酰胺；MTT ；单细胞凝胶电泳；DNA 损伤；ROS 作 者：孙佩君 指导教师：肖 卫 II 二甲基甲酰胺对V79 细胞的毒性作用研究