最新人工诱导栉孔扇贝(Chlamys farreri)雌核发育胚胎的基因位点纯合性分析.pdfVIP

基因位点纯合性分析 摘要 induced 人工诱导雌核发育(Artificiallygynogenesis)是指通过物理、化学或 生物学方法激活卵子，启动其卵裂机制，卵子仅依靠雌核发育形成胚胎．进而产 生只具有母系遗传物质的后代个体的发育形式。雌核发育后代的遗传物质完全来 源于雌性亲本，便于进行基因纯化和纯系克隆．因此人工诱导雌核发育技术在水 产生物遗传改良和新品种培育方面具有潜在的应用价值。同时，雌核发育可以为 单倍体研究、性别决定机制、基因作图、基因-着丝粒重组等问胚的研究提供实 验材料，在基础遗传学研究的相关领域中具有重要意义。本研究以我国北方沿海 养殖贝类栉孔扇贝(Chlamys细f)为研究对象，进行了紫外线照射灭活栉孔 扇贝精于遗传物质中实验参数的优化，对紫外灭活精于诱导的栉孔扇贝雌核发育 后代进行单个胚胎全基因组扩增(Whole Nucleaotidc 已开发的栉孔扇贝单核苷酸多态性(Single Polymorphism，SNP)标 记对扩增产物进行评价与分析。所获得主要结果如下： l、使用不同辐射剂量的紫外线照射栉孔扇贝精于，使其达到遗传失活的状 态，使用遗传失括的精子对栉孔扇贝正常卵子进行授精，诱导雌核发育获得后代 cm。2s。的紫外线下照射50s是栉孔扇贝精 胚胎。结果表明，辐射强度为800pW 子遗传失括的适宜辐射剂量．此条件下流式细胞仪检测胚胎细胞单倍体率为 825％。在照射时间增加过程中，早期胚胎存活率在20s之前呈下降趋势，20s 5％，体现出较明显的“Hertwig效应”。 后转而上升．至40s时达到最大值77 2、细胞荧光染色观察结果显示，雌核发育后代胚胎的细胞数量满足全基因 组扩增反应对细胞数目要求，采用逐级稀释的方法，在显微镜下挑选分拣出单个 胚胎，并利用多重置换扩增的方进行单胚胎全基因组扩增。经检测，扩增产物主 带的片段长度较长，产物DNA总壁在25119左右。SNP标记的分型实验对扩增 产物的评价结果表明，雌核发育后代胚胎全基因组扩增产物的分型检出率为 03％。 9627％，SNP分型结果与标准对照组分型结果的一致性比率为99 3、实验使川96个SNP位点对雌核发育胚胎的基因组扩增产物的纯台性进 67％96 行检测分析．在所检测的65个胚胎中，基因位点纯合率介于91 88％之 间，平均为(9481±1 56)％，显著高于相应雌性亲本的位点纯合度(t检验， PO 05)。对32个位点上雌核发育家系GF5中雌性亲本等位基因在后代中分离 情况的统计结果表明，24个位点符合盂德尔分离规律1：l的预测值，8个位点偏 05)。 离l：】的理论分离值(啦检验，P0 关键词：栉孔扇贝．雌核发育，全基因组扩增，单核苷酸多态性 Genomic induced homozygosityanalysisofartificially in embryos gynogeneficZhikong Abstract induced referstothe of activated Artificiallygynogenesis developmenteggs by means or treatmentAll informationofthe