溴甲酚绿法测定血清白蛋白【】.pptVIP

实验五 溴甲酚绿法测定血清清蛋白 一、实验目的 掌握：溴甲酚绿法测定血清清蛋白的基本原理和操作。 熟悉：血清清蛋白测定的临床意义。 了解：溴甲酚绿法测定血清清蛋白的特点和注意事项。 血清清蛋白在pH4.2的缓冲液中带正电荷，在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色的复合物，在波长630nm处有吸收峰，其颜色深浅与清蛋白的浓度成正比。 与同样处理的清蛋白标准比较，可求得血清中清蛋白含量。 三、试剂与器材 1. 0.5mol/L 琥珀酸缓冲贮存液 2. 10mmol/L BCG贮存液 3. 叠氮钠贮存液 4. 聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35）贮存液 5. BCG试剂 6. 40g/L 清蛋白标准液 7. 分光光度计 　立刻混匀后，在波长630nm处用空白管调零，30s±3s内读取吸光度。 五、计算 　　　　　　　　　　 血清清蛋白(g/L)＝āu/ās×蛋白标准液浓度(g/L) = āu/ās×40 (g/L) 参考范围：正常人:35－55g/L 六、注意事项 1. BCG是一种pH指示剂，变色域为pH3.8（黄色）~5.4（蓝绿色），因此控制反应液的pH是本法测定的关键。 2. 时间必须控制准确。因为BCG不但与清蛋白呈色，而且与血清中多种蛋白质成分呈色，其中以a1-球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反应速度较清蛋白稍慢。由于在30s内呈色对清蛋白特异，故BCG与血清混合后，在30s内读数可明显减少非特异性呈色反应。 七、方法学评价 1. 本法操作简便、快速，胆红素、溶血和中度脂血症无干扰，既可手工操作，也能自动分析，是目前国内测定血清清蛋白的最常用方法。 2. 本法线性范围为10~60g/L，RCV4%。但该法与溴甲酚绿紫法比较，对血清清蛋白特异性稍差， 3. 重复性差，清蛋白特异性稍差（极性氨基酸参与反应，但参与运输的球蛋白也会与染料反应，不过反应速度较慢）。 4.溴甲酚紫法：特异性较好，但不能与动物血清反应，而目前的质控血清多为动物血清，因此临床应用少。 4. 电泳法：可以将白蛋白、球蛋白等分开，并分别测定其含量，是种较好的方法，但过程相对复杂。 八、临床意义 1. 血清清蛋白 ：常见于严重脱水所致的血浆浓缩。（比较少见） 2. 血清清蛋白 :临床比较重要和常见，常与总蛋白降低的原因大致相同。 急性 ：多见于大出血和严重烧伤。 慢性 ：肾病蛋白尿、肝功能受损，肠道肿瘤及结核伴慢性出血、营养不良和恶性肿瘤。 若低于20g/L，临床上出现水肿。 3. A/G比值：正常人A/G1.0 某些病人可同时出现清蛋白减少和球蛋白升高的现象，若A/G1.0，称为A/G比值倒置，常见于多发性骨髓瘤和聚球蛋白升高。 4.先天性清蛋白缺乏症：有文献报道，因清蛋白合成障碍，血清中几乎没有清蛋白而导致清蛋白缺乏。 * * 二、实验原理　 pH=pI +OH- pHpI +H+ +OH- +H+ pHpI 氨基酸的兼性离子 阴离子 阳离子 血清清蛋白的pI为：4-5.8 在pH4.2的缓冲液中，清蛋白带正电荷 二、实验原理　 清蛋白+ BCG 蓝绿色复合物 + - pH4.2 Brij-35 ddH2O 400mL 琥珀酸缓冲贮液100mL BCG贮液8.0mL 叠氮钠贮液2.5mL， Brij-35贮液2.5mL， ddH2O定容至1000mL。 U2 U1 S2 S1 4.0 — — 0.02 测定管 4.0 — 0.02 — 标准管 4.0 4.0 4.0 BCG试剂 — — 0.02 蒸留水 — 0.02 — 白蛋白标准液 0.02 — — 血清 空白管（B） 加入物（mL） 四、操作