一显微镜的使用油浸系物镜的使用.PDF

实验一 显微镜的使用、油浸系物镜的使用 一、实验原理 微生物学研究用的显微镜通常有低倍物镜 (16mm，10×)高倍物镜(4mm，40-45×)和油镜 (1.8mm，95-100×)三种。油镜常标有黑圈或红圈，它是三者中放大倍数最大的。 使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与接物镜之间，不是隔一层空气，而是 隔一层油质，称为油浸系。这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率 n＝1.52，与玻璃基本 相同。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。如果玻片与物镜之 间的介质为空气，则称为干燥系；当光线通过玻片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的 光线显然减少，这样视野的照明度就减低了(图Ⅰ-1)。 利用油镜不但能增加照明度；更主要的是能增加数值口径。因为显微镜的放大效能由 其数值孔径决定的。所谓数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角)的一半正弦， 乘上玻片与物镜间介质折射率所得的乘积，可用下列公式表示： α N ⋅A n ⋅sin 2 N ⋅A 数值孔径 式中 n 介质折射率 α 最大入射角，即镜口角 数值孔径的大小又是衡量一台显微镜分辨力强弱的 依据；分辨力是指显微镜能辨别物体两点间最小距离的 能力。 λ 能辨别两点间最小距离 2N ⋅A 式中 λ=光波波长 由上述可知若 n 值和α角越大则 N·A越大或光波波长越短，则显微镜的分辨力越大(图 Ⅰ-2)。 一些物质的折射率： 水 1.33 玻璃 1.52 空气 1.0 香柏油 1.515。 二、实验器材 1、仪器 显微镜； 2、 材料 巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)等标本片，香柏油，二甲苯，擦镜纸。 三、操作步骤 1、取镜 显微镜是光学精密仪器，使用时应特别小心。从镜箱中取出时，一手握镜臂， 一手托镜座，放在实验台上。在使用时要特别小心。使用前首先要熟悉显微镜的结构和性能， 检查各部零件是否完全合用，镜身有无尘土，镜头是否清洁。做好必要的清洁和调整工作。 显微镜构造见图Ⅰ-3 图Ⅰ-3 光学显微镜的构造 1. 物镜转换器 2. 接物镜 3.游标卡尺 4.载物台 5.聚光器 6. 彩虹光阑 7.光源 8. 镜 座 9. 电源开关 10. 光源滑动变阻器 11. 粗调螺旋 12. 微调螺旋 13. 镜臂 14.镜筒 15. 目镜 16.标本移动螺旋 2、调节光源 1) 将低倍物镜旋到镜筒下方，旋转粗调螺旋，使镜头和载物台距离约为 0.5 厘米左右。 2) 上升聚光器，使之与载物台表面相距 1毫米左右。 3) 左眼看目镜调节反光镜镜面角度(在天然的光线下观察，一般用平面反光镜；若以灯 光为光源，则一般多用凹面反光镜)。开闭光圈，调节光线强弱，直至视野内得到最均匀最 适宜的照明为止。 一般染色标本油镜检查对，光度宜强，可将光圈开大，聚光器上升到最高，反光镜调至 最强；未染色标本，在低倍镜或高倍镜观察时，应适当地缩小光圈，下降聚光器，调节反光 镜，使光度减弱，否则光线过强不易观察。 3、低倍镜观察 低倍物镜(8×或 10×)视野面广，焦点深度较深，为易于发现目标确定 检查位置，故应先用低倍镜观察为宜。操作步骤： 1) 先将标本玻片置于载物台上(注意标本朝上)，并将标本部位处于物镜的正下方、转 动粗调螺旋，上升载物台使物镜至距