石蜡切片制作过程40.pptxVIP

石蜡切片制作过程国家玉米改良中心河北分中心脱水、透明第1日1.脱水前用70%的酒精浸洗两次，第一次浸洗1-2h，并抽真空15min左右，第二次换液后在室温下过夜第2日：2.在浓度分别为80%，85%，90%，95%，100%，100%的酒精中脱水，各级酒精脱水时间为90min。共需9h。3.经1/2二甲苯和1/2酒精的混合液过渡，在纯二甲苯，纯二甲苯中进行透明，过渡和两次透明的时间也都是90min。共需4.5h（建议在第二次二甲苯透明时也抽真空一次，保证材料中不存在气泡）浸蜡第2日晚4.将装有透明好的材料的小瓶（此时小瓶中的二甲苯的量应位于小瓶的1/2处）中放入浮蜡（使用浮蜡的目的使其不与材料直接接触，否则会使材料变脆），使浮蜡占据小瓶另外的1/2，盖上瓶盖，放于38℃烘箱过夜。5.继续向小瓶中加浮蜡或蜡末，并升高温度至45℃（目的是加大石蜡在二甲苯中的溶解量），若到晚上蜡末仍未溶解完全，就将温度升到50℃过夜。（但要注意温度过高会使材料变脆）6.晚上将干净的蜡块放于65℃烘箱中，便于次日直接使用融化好的石蜡蜡末和浮蜡的制作方法：需要提前制备好蜡末的制作方法：将过滤好的并凝固彻底的石蜡块在筛子上来回擦即可获得。浮蜡的制作方法：将装有干净的熔融石蜡瓶子从烘箱中拿出，不断顺时针或逆时针摇晃使石蜡液体中产生气泡，直至液体的石蜡摇晃不懂而变成固体的浮蜡，建议将浮蜡切碎后使用，加快的溶解速度。浸蜡、包埋第3日7.将烘箱温度设为68℃倾出1/2石蜡二甲苯，导入1/2融化石蜡?倾出1/2石蜡二甲苯，导入1/2融化石蜡?将材料放入纯石蜡中?将材料放入纯石蜡中?将材料放入纯石蜡中，每次2h。第3日晚8.将折好的包埋盒放在用10μL枪头盒制作的容器内置于地面，将液体石蜡倒入包埋盒内，等1min左右，借地温使包埋盒底部稍作凝固后，镊子在酒精灯火焰上预热后，将材料从小瓶中夹入包埋盒内，并将材料在包埋盒内摆好。（此过程越快越好，如果包埋盒内蜡的表面出现薄膜时，用烧烫的镊子将其拨开）此时，也应注意小瓶内石蜡的凝固，为防止此现象的出现，应不时的在酒精灯火焰上烤下。将材料都夹入包埋盒内后，双手将包埋盒缓缓提起，并移入盛有凉水的水盆中，待表层石蜡凝结一层薄膜后，迅速将包埋盒翻转使盒底向上，并用重物（筛子最好）将包埋盒压在水底。1h后即可凝固好。9.将包埋好的蜡块放入4℃储藏，随用随取。蜡块的修整和切削第4日1.修蜡：将蜡块修成长宽比为3:2而且上下两边一定要尽量平行（保证切蜡时，蜡带是直的而不是弯的），材料距四周的距离约为2mm的小蜡块即可。2.切蜡：将蜡块粘在小木块上，并在-20℃冻几分钟（使材料和石蜡的硬度更加一致，方便切蜡），将木块固定在切片机上开始切片。展片和贴片第4日1.展片：粘贴剂使用梅氏蛋白甘油粘贴剂1%的稀释液：在载玻片（用洗涤灵清洗干净的载玻片）上滴200μL的稀释液，并涂均匀，将蜡带置于稀释液上并调整位置，置于50℃烘箱。2.贴片：将载玻片置于50℃烘箱4h以上即可完成。备注：为了将染色和修蜡、切片、贴片连贯起来，建议在10:00开始修蜡至贴片的步骤，并在12:00之前完成。染色（海氏苏木精——固绿）1.第4日下午16:30开始：纯二甲苯 5 min纯二甲苯 5 min 1/2二甲苯和1/2酒精 5 min 100%酒精 5 min100%酒精 5 min 95%酒精 5 min 85%酒精 5 min 75%酒精 5 min 50%酒精 5 min 蒸馏水轻轻漂洗——4%铁帆 4h 蒸馏水轻轻漂洗——0.5%苏木精 8-12小时 2.第5日上午8:00开始：2%铁帆 20 min蒸馏水轻轻漂洗——50%酒精 5 min 75%酒精 5 min85%酒精 5 min95%酒精 5 min 0.1%固绿 1 min 100%酒精 30 s 100%酒精 30 s1/2二甲苯和1/2酒精 5 min纯二甲苯 5 min——加拿大树脂封片备注：每一个18×18mm的盖玻片用树胶二甲苯（1:1）的量为18μL。