试验十粗糙链孢霉的分离和交换.ppt

实验十 粗糙链孢霉的分离和交换 一、实验目的 学习粗糙链孢霉的培养方法和杂交技术。 了解粗糙链孢霉的生活史。 通过对链孢霉杂交产生的子囊孢子的统计分析，验证遗传学的基本规律，掌握有关基因的着丝粒距离的计算和作图。 二、实验原理 链孢霉的四分子（ordered tetrad）分析涉及到其减数分裂过程中的重组、交换的整个过程，两种不同接合型（mating type）的个体产生的短暂二倍体进行的减数分裂形成了4个单倍体的细胞。根据在同源染色体联会时有无非姊妹染色体的交换，带有基因标记的子囊孢子可以直接显现出来，因此是遗传分析工作中的有用工具。 三、实验材料 粗糙链孢霉的野生型菌株（Lys+,接合型A）、赖氨酸缺陷型菌株（Lys-，接合型a） 四、实验用具药品 显微镜、镊子、解剖针、接种针、载玻片、试管、培养皿、50.0g/L次氯酸钠、生理盐水等。 五、实验方法及步骤 1．制备培养基 野生型菌株的培养基（土豆培养基） 培养缺陷型菌株的培养基 杂交用培养基 2.菌株活化 把野生型及缺陷型的菌株从冰箱中取出，分别接种到相应的培养基上进行扩大培养，通常28℃温箱培养5天左右。注意接种要严格在超净工作台上进行无菌操作，以防细菌和其他真菌的感染 3.接种杂交 无菌条件下取野生型和缺陷型的少许菌丝接种到同一试管的杂交培养基上。 在杂交培养基中放入一张灭菌的滤纸，分别把两种菌株接在滤纸的两侧以便于杂交成功后收获子囊果。 接种结束后，注意要贴上标签，写明亲本菌株及杂交日期。 将试管放在25℃下恒温培养2～3周（30℃以上即抑制原子囊果的形成），当出现黑色的子囊果时，及时进行镜检。野生型的子囊孢子成熟后为黑色，赖氨酸缺陷型的子囊孢子成熟较慢因而呈灰色或浅灰色。在此过程式中一定要经常取材镜检，因为只有发育适中的子囊果便于解剖和观察。 4．结果分析 用解剖针从培养基中的滤纸上挑取颜色较深、个体较大的子囊孢子置于载玻片上。 滴加一滴50.0g/L的次氯酸钠溶液，用解剖针的针尖轻压子囊果，使其破裂将子囊释放出来，在低倍显微镜下进行观察，即可观察到30-40个子囊,观察子囊中子囊孢子的排列情况。 注意不能使分生孢子散出。观察过的载玻片、用过的镊子和解剖针等物都需放入50.0g/L的次氯酸钠中浸泡后取出洗净，以防止污染实验室。 粗糙链孢霉的分离和交换 (a)成熟的子囊果； (b)散开的子囊 5.着丝粒作图 交换值=（交换型子囊数/观察到的子囊总数）×1/2×100% 五、作业及思考题 1.高等动、植物的有性生殖和基因交换与粗糙链孢霉有什么异同？ 2.根据实验统计结果，绘出粗糙链孢霉lys基因与着丝粒的连锁图。 3.什么是极化子模型？在粗糙链孢霉的杂交过程中应主意哪些问题？ * *