一种新型的小鼠模型：告诉你如何在活体内「实时」成像GPCR的信号传导,为药物开发带来了更多的可能性26.pdfVIP

一种新型的小鼠模型：告诉你如何在活体内 「实时」成像GPCR 的信号传导，为药物开 发带来了更多的可能性 原创2017-10-30 订阅号 APExBIO 研究意义 G 蛋白偶联受体（GPCRs）是涉及几乎所有生理过程的细胞表面受体的超家族， 是很多批准药物的主要靶标。然而，尽管 GPCRs 在生物学和疾病方面具有巨大的 研究潜力，但是其在天然生理环境下（如活生物体内）的活化情况一直不得而知， 因而与GPCRs 相关联的很多重要临床研究受到了很大阻碍。近日，来自美国国家 糖尿病、消化和肾脏疾病研究所的研究团队，构建了一种 S1P 荧光素酶信号小 1 鼠模型，可以在小鼠体内实时实现GPCR 活化的生物发光成像。在正常和病理条 件下，S1P 荧光素酶信号小鼠可以对 S1P 的药理激动剂作出反应并实时定位 S1P 1 1 1 活化情况。重要的是，该策略可以应用于临床上重要的其它 GPCR 家族成员。总 之，该研究提供了前所未有的可以进行 GPCRs 活化信号的实时活体成像系统，为 药物开发提供了重要工具和方向。 【背景】G 蛋白偶联受体（GPCRs，G protein-coupled receptors），也称为七 跨膜结构域受体，是人类基因组中最大和最多样的基因超家族。 GPCR 被广泛表 达，通过多种细胞外配体启动细胞信号转导，并且几乎涉及所有的生理过程。它 们在临床医学中也是非常重要的，是主要的药物靶标。据统计约 30％批准的药物 靶向 GPCRs。然而，尽管 GPCRs 具有巨大的生物学和临床意义，但是 GPCRs 如何 通过内源或外源配体实现体内活化的一直不得而知，这是因为缺乏一种技术—在 天然生理环境中实现 GPCR 的激活成像。 鞘氨醇-1-磷酸受体 1 （S1P ，Sphingosine-1-phosphate receptor 1）是 GPCR 1 家族成员之一，对生物活性鞘脂具有高亲和力。S1P 在内皮细胞中高度富集，是 1 血管屏障功能的关键调节因子，也在免疫和神经系统中起重要作用。S1P-S1P 信 1 号传导与多种疾病过程相关，包括感染、多发性硬化、动脉粥样硬化、炎性肠病 和癌症。 配体激活的 GPCRs 通过 G 蛋白和其它效应物刺激细胞内信号传导途径，包括 β-arrestins。激动剂结合后，GPCRs 和 β-arrestin 之间的相互作用已被用于 定量受体激活的测定。 作者之前开发了一种用于检测激活的 S1P1 的小鼠模型， 其中绿色荧光蛋白（GFP）报告基因被激活。该模型能够以累积的方式识别受体激 活的细胞，但不适合于实时 GPCR 激活信号的活体成像。 本文中，作者构建了一个小鼠遗传模型，能够在受体的天然生理环境中实时成像 S1P 信号传导。这种 GPCR 激活荧光素酶信号模型提供了以前没有实现的一种新型 1 研究 GPCR 的方法，在活的动物中实时地产生内源性受体激活状态的空间和时间 信息。 如何产生 S1P 荧光素酶信号传导小鼠？ 1 ▲图 S1P 荧光素酶信号传导小鼠模型的构建 1 在活体小鼠中实时成像激活 GPCR 的策略是采用萤火虫萤光素酶片段互补系统，检 测配体激活的 S1P 和 β-arrestin2 之间的相互作用。S1P 和 β-arrestin2 都被 1 1 遗传修饰为单独的融合蛋白，以携带失活但互补的荧光素酶片段。将 S1P 的C 末