人白介素6(IL-6)酶联免疫分析试剂盒使用说明书40.pdfVIP

人白介素6 （IL-6）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：15.6 pg/ml -1000 pg/ml 最低检测限：3.9pg/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人IL-6，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期：6 个月 预期应用：ELISA 法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-6 含 量。 说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任 何影响。 概述 白细胞介素或白介素（interleukin，IL）是一组细胞因子（分泌的信号分子）。最早发现在 白细胞中表达作为细胞间信号传递的手段。实际上，白细胞介素可以由多种细胞产生。免疫 系统的功能，在很大程度上依赖于白细胞介素。一些罕见的白细胞介素缺陷不足都常出现自 身免疫性疾病或免疫缺陷。IL-6 是一种分子量为26ｋＤ的蛋白质，由184 个氨基酸组成。 最初人们只发现其在白细胞中合成并在白细胞间发挥作用而命名。随研究的不断进展，人们 逐渐发现不仅激活的淋巴细胞、单核巨噬细胞可以合成和分泌IL-6，而且骨髓细胞和部分肿 瘤细胞等也可以产生IL-6。其作为一种机体在免疫应答中产生的重要介质,具有多种生物学 活性。IL-6 是一种多效性细胞因子，能调节多种细胞功能，包括细胞增殖、细胞分化、免疫 防御机制及血细胞生成等。IL-6 与多种肿瘤发生、发展关系密切，它通过干预细胞的黏附性 和活动力、血栓形成、肿瘤特异性抗原的表达及肿瘤细胞的增殖,从而影响肿瘤的进展。它 还能调节多种细胞功能,包括细胞增殖、细胞分化、免疫防御机制及血细胞生成等。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IL-6 抗体的微孔中依次加入标本或标 准品、生物素化的抗IL-6 抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品 中的IL-6 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板（Assay plate ）：一块（96 孔）。 2.标准品（Standard）：2 瓶（冻干品）。 3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。 4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。 5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。 6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100） 7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100） 8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。 9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。 10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 1.标准规格酶标仪 2.高速离心机 3.电热恒温培养箱 4.干净的试管和Eppendof 管 5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6.蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1.血清：全血标本请于室温放置2 小时或4℃过夜后于1000 x g 离心20 分钟，取上清即可 检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2.血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2 -8° C1000 x g离心15 分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g 离心20 分钟，取上清即可检测，或将标本放 于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 标本的稀释原则： 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准 曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度 时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则：2 瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10 分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助