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微生物育种实训 实训内容 项目一 培养基的配置及灭菌 项目二 土壤微生物的采样 项目三 土壤微生物的分离纯化 项目四 芽孢杆菌的富集培养 项目五 出发菌株的分离纯化 项目六 紫外线诱变剂量的选择与诱变育种 项目七 高产菌株的初筛 一 从土壤中分离细菌 放线菌 酵母 霉菌 芽孢 （土样地点：金工厂西红柿地） 1 配制培养基 2 无菌器材 3步骤 4筛选出发菌株 5记录结果 二 芽孢的诱变 1 配制培养基 牛肉膏蛋白胨培养基：蛋白胨1.5g 氯化钠0.075g 琼脂3g 自来水150ml(原始pH=5 调节后 pH=7） 高氏一号培养基：可溶性淀粉5g 硝酸钾0.15g 磷酸氢二钾0.075g 硫酸镁0.075 g 氯化钠0.075 g 硫酸亚铁0.0015g 琼脂3 g 自来水150ml(原始pH=8 调节后 pH=7.4） 豆芽汁葡萄糖培养基：黄豆芽15g 葡萄糖4.5g 琼脂3g 自来水150ml 将洗净后的豆芽放在水中煮沸30min，用2层纱布滤去豆芽，将豆芽 汁补足水分(原始pH=7 调节后 pH=6） 马铃薯培养基：去 皮马铃薯30 蔗糖3 琼脂3g 自来水150ml 将马铃薯去皮切成小块于锅中加热煮沸30min，用2层纱布过滤取其滤液再补足水分(原始pH=8 ） 牛肉膏蛋白胨+2%可溶性淀粉培养基：同一+3g可溶性淀粉(原始pH=6 调节后 pH=7） 2、无菌器材 将培养皿15个、移液管5个、锥形瓶6个（5个装培养基、1个加玻璃珠和90毫升水）、涂布器3个、试管15个（5个装9毫升蒸馏水、10个装培养基）、 3、步骤 （1）稀释土样 称取土样10g，放入90ml无菌水的锥形瓶中，震荡摇匀，即为稀释10-1的土样悬液 （2）另取装有9ml无菌水5支，用记号笔编上-2 -3 -4 -5 -6 ，取已稀释成-1的土样液，振荡摇匀，用无菌吸管吸取1ml土壤悬液加入-2的无菌水试管中，震荡摇匀，即为-2土壤稀释液，同样依次稀释-3 -4 -5 -6土壤稀释液。 （3）接种 从稀释液（-4 -5 -6 ）个0.1ml分别加到高氏一号培养基 豆芽汁培养基上，用涂布法 从稀释液（-4 -5 -6 ）个0.1ml分别加到已灭菌的空平板上，再加上牛肉膏蛋白胨培养基，混匀。 把（-4 -5 -6 ）试管放入水浴锅中加热（90度 30min）再从稀释液（-4 -5 -6 ）各吸取0.1ml分别加到3个牛肉膏蛋白胨+2%可溶性淀粉培养基。 霉菌做一个之子划线二个四区划线（-1稀释液） （4）放入培养箱培养 细菌培养41小时 放线菌培养5天 霉菌培养3~5天 酵母培养48小时 芽孢24小时 （5）观察 细菌 芽孢用简单染色法 霉菌 酵母用水镜片 放线菌用插片法 制简单染色法（细菌 芽孢） 涂片 取一块干净的载玻片在其 中央加一滴无菌水，按无菌操作法从菌种斜面取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂布面积为1~1.5平方厘米 晾干 让涂片在室温下自然晾干 固定 手持玻片一端使涂菌的一面朝上，通过微火2~3次，在火上固定时用手触摸涂片反面，一步烫手为宜，不可使载片在火上烤，以免细菌形态被毁坏 染色 将涂片至于水平位置，滴加沙黄染色液，盖于涂菌处，染色约两分钟 水洗 将载片倾斜，置于自来水的细水流下，水流由载片上端流下，不可直接冲在涂菌处，当洗至从载玻片流下的水中无染色液的颜色时停止 干燥 将洗过的涂片在空气中自然晾干或吸水纸吸干，注意不要将菌体擦掉 镜检 将制的镜片放在显微镜上观察其形态 制水镜片（酵母 霉菌） 取一块干净的载玻片在其中央加一滴无菌水，按无菌操作法从菌种斜面取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂布面积为1~1.5平方厘米 用盖玻片一端与薄膜充分接触盖上，注意无气泡 制插片法（放线菌） 用镊子夹住盖玻片一端，在酒精灯外焰灼烧，使载玻片微热 将载玻片置于菌落上，轻压固定 用简单染色法染色 3透明圈法挑选出发菌株 将碘液滴入培养皿中进行染色，观察其透明圈，测量透明圈及菌落直径 以透明圈及菌落直径的比值大的作为诱变的出发菌株 4记录结果 （1）芽孢（培养18小时后计数） 菌落计数 （培养基-4 145个） 每克土