第一章 植物基因工程的现状、前景.ppt

3　多基因共转 优　势：许多重要的农艺性状属于定量性状或受多基因控制,基因工程已从最初的转入单一基因逐渐向转入多基因发展,从而可实现完整代谢途径、细菌操纵子或复杂多亚基蛋白大分子的编码基因的转化,这一发展趋势将给食品、营养、医药、保健等领域带来革命性的影响。 进　展：尽管核基因组多基因共转化过程中存在不少技术障碍,如核基因组不能处理多顺反子、转入多基因需要进行大量育种工作、由于相同调控序列的反复出现易产生基因沉默、多基因插入易产生位置效应等,研究仍取得重大进展。2000年Ye XD等耗时7年,终于成功地将?-胡萝卜素生物合成途径中所需的3个酶基因转入了水稻中,使其可富集维生素Ａ原。维生素Ａ缺乏症可导致夜盲甚至失明,这一成就被誉为”金色大米”。 为实现多基因的同时转化, Dasgupta等将烟草脉班驳病毒(TVMV)的NIa蛋白酶插在其他两个基因中共同进行转化,该酶的水解活力可迅速释放多聚蛋白中另外两个基因的编码产物。叶绿体基因组可处理多顺反子的能力及其精确、安全、高效的特点更有利于实现多基因共转。且表达产物在叶绿体中可完成二硫键交联、正确折叠等后转录修饰,具备生物活性。许多涉及多基因协同作用或多亚基装配的生物大分子如人血清蛋白(HSA)、用于龋齿治疗的Guy’13单克隆抗体、霍乱毒素β亚基等均实现了在叶绿体中的表达与装配。 4　控制基因漂移 基因约束基因漂移可导致“超级杂草”或新杂草的产生、破坏生态平衡及生物多样性。目前,除叶绿体基因工程之外,还发展了许多分子技术来控制基因漂移。 英国《自然》和美国《科学》杂志又有陆续报道，GM食品中的DNA片段可以进入人体肠道中的细菌体内。一个证据是，人类肠道中耐受抗生素的超级细菌中能够找到GM食品中的标记基因，即转入作物中起特殊作用的抗虫害基因。这意味着，过去所怀疑的“基因漂移”已成为事实。 5　实现对转入基因的实时监控 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)是一种从水母等海洋生物中分离得到的可在紫外光或蓝光下发出绿色荧光的27kDa的单聚体蛋白,它使植物基因工程的研究人员第一次拥有了通用的、可对外源基因进行实时监控的可视化标记。一方面,它可在实验室阶段帮助实现对核基因或叶绿体基因转化过程的监控。已报道将GFP基因与抗性标记相连成功运用于小麦、苹果、大豆、油菜、甘蔗、烟草、莴苣、玉米等植物的核基因转化过程中,不仅可帮助克服抗生素或除草剂对植物组织再生的不利影响,还有助于转化组织的分离。 Muhammad等报道了利用GFP基因与抗生素抗性标记基因相融合,实现了对叶绿体基因转化过程的监控,可方便、高效地获得叶绿体被均一转化的植物组织。GFP还可望完全取代非可视化的选择标记,这在大麦和水稻中已实现,与抗性标记系统比较,它降低了可处理的组织量下限,简化了筛选步骤,节约了处理时间。另一方面,由于转基因作物在生态环境安全性方面存在的许多不确定性,如基因漂移、外源基因表达产物对非目标生物的作用等,使得建立适用于田间运用的外源基因监控系统变得十分必要。GFP则是可用于标记种子、花朵或其他器官的非常有价值的工具。 Hudson LC等将花粉特异性启动子引导下的GFP基因导入烟草中,实现对花粉的GFP标记,从而可区分转基因植物和非转基因植物的花粉,追踪转基因植物花粉的移动情况、空间传播方式和传粉机制,估计出漂移到一定距离外的转基因植物花粉数量。他们将开花的转基因植物与蜜蜂共置一笼中,在显微镜下观察到蜜蜂的翅、头、腿部带上了荧光花粉颗粒。转入种皮特异性启动子引导的GFP基因,可对转基因种子进行GFP标记,从而实现对转基因种子和非转基因种子的大范围分拣,追踪其扩散。这一非破坏性、实时、动态、可视的监控技术无疑将推动植物基因工程及其在农业、生态安全性方面的研究。 Onion epidermal cells transiently expressing green fluorescent protein (smGFP) in the cytoplasm and nucleoplasm. Cells were ballistically transformed. The GFP image is a 3D projection of a series of confocal sections and it has been superimposed on a median differential interference contrast image so that non-transformed cells are visible. Photomicrograph by Kerry-Ann Nakrieko (Plant Metabolism). RNA silencing