人教版选修1专题2课题1微生物的实验室培养（共72张PPT）.ppt

* 信封1个、40个培养皿、8个灭菌试管、 1个灭菌的移液管 牛肉蛋白胨？（对照）----5个／人、 * 菌落数*稀释度/稀释液体积 0.1ml稀释液涂布的菌落数*稀释倍数/涂布的体积 * 一、血球计数板的使用原理 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。血球计数板是常用的计菌器之一。 血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。在血球计数板上，刻有一些符号和数字(见图一)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。? 计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。 1．16×25型的计数板? 将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数（见图二）。将每一中格放大，可见25个小格。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算： 酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数 2．25×16型的计数板? 中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用（见图三）。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算： 酵母细胞个数／1mL ＝80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×稀释倍数 计算公式 每克样品中的菌落数＝（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。 4、实验结果的观察 结果： 酚红指示剂变_____，初步鉴定该细菌能够分解尿素 分析：细菌能分解尿素产生_____，使培养基呈碱性，氨增加pH升高，酚红由无色变为红色。 操作：在以_______为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂 尿素 （鉴别培养基） 红色 氨 5、实验结果的鉴定 课题3.分解纤维素的微生物的分离 一、纤维素的分解 纤维素 （多聚葡萄糖） Ｃ１酶 Ｃｘ酶 纤维二糖 葡萄糖苷酶 葡萄糖 与刚果红作用 红色复合物 不与刚果红作用 由纤维素酶分解（一种复合酶） 二、设计原理 1、土壤中获取菌种 选择纤维素丰富的环境 2、选择培养 配制以纤维素为唯一碳源的培养基 3、梯度稀释 为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？ 生物与环境相互依存，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高。 将滤纸深埋土壤中的作用？多深为宜？ 滤纸埋在土壤中使纤维素分解菌相对聚集，实际是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境；10cm左右。 4、将样品涂布到鉴别培养基上 5、挑选产生透明圈的菌落（刚果红染色法） 唯一碳源 按物理性质划分： 液体培养基 羧甲基纤维素钠 微生物的培养与观察： 1、培养： 30—37 C恒温箱 1—2天 2、观察统计三次：表格形式 观察：菌落数目、形态、大小、颜色 ？ 统计：1次/24h-----共三次 取的标准---数目稳定 0 小结：二、实验设计： ----统计土壤中尿素细菌的记数 三、结果分析与评价： １．结合对照： 1]、有无杂菌污染？ 2]、选择培养基有无选择性？ 2、计数： 1]、某稀释度：30---300个菌落/平板？ 2个平板的菌落数是相接近的？ 2]、分解尿素的细菌的菌落数是多少？ 与其他同学结果接近吗？ 如果差异大分析原因是什么？ 3.生化鉴定：+酚红指示剂检测氨的存在