人教版选修3专题1第二节基因工程的基本操作程序（共22张PPT）.ppt

基因操作的基本步骤 获得目的基因的方法 1）从基因文库中获取目的基因 PCR技术—多聚酶链式反应 原理： 前提： 条件： 将目的基因导入受体细胞（动物细胞） 显微注射法 将目的基因导入受体细胞（微生物细胞） Ca2+处理 5.哪项不是基因表达载体的组成部分( ) A.启动子 B.终止密码 C.标记基因 D.目的基因 6.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法( ) A．基因枪法 B．显微注射法 C.农杆菌转化法 D．花粉管通道法 * * * * * * * * * * * 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 目的基因的获取 供体细胞 受体细胞 2） 2）利用PCR技术扩增目的基因 3）人工合成 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中直接获取 1.基因文库：概念见P9 2.基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类 种类 基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 3.获取目的基因的根据： 见课本P9 DNA复制 一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 DNA的两条链为模板 温度控制 作用： 短时间内大量扩增目的基因 场所： PCR扩增仪（体外） 利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术扩增过程 a、变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下， 断裂，形成_______ b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物 与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 1）反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法（化学合成法） ： 1. 用_____________切断目的基因和质粒，使其产生_____ ____________。 —— 核心 2、再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 同一种限制酶 DNA连接酶 相同的黏性末端 (二)基因表达载体的构建 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 基因表达载体的组成： 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 (三)将目的基因导入受体细胞 常用的受体细胞： 动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。 将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 转化—— 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 方法 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 ——显微注射法 —— 感受态细胞吸收DNA分子 农杆菌转化法（最常用） 基因枪法 花粉管通道法 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上 农杆菌 导入植物细胞 整合到受体细胞的染色体上 目的基因的遗传特性得以维持稳定和表达 1.农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物。Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上 2.转化 2.微生物作受体细胞原因： 将目的基因导入微生物细胞 3.转化方法： 大肠杆菌 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→ _________细胞吸收DNA分子。 Ca2+ 感受态 感受态 1.常用菌： (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测— 鉴定— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 DNA分子杂交 抗原-抗体杂交 1.下