人教版选修3专题1第二节基因工程的基本操作程序（共17张PPT）.ppt

作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述元件的主要理由是： （1） 生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达； （2） 通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录； （3） 目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记； （4） 为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如增强子等； （5） 有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做成目的基因与标识基因的融合基因），如绿色荧光蛋白基因等。 即真正被用作载体的质粒都需在天然质粒的基础上进行人工改造， 且受体细胞不同，导入方法不同，均需构建。 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法、 Ca2+处理 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物；Ti质粒的T－DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。 转化:目的基因插入T－DNA→农杆菌→导入植物细胞→稳定维持和表达 操作程序： 目的基因表达载体提纯→取卵（受精卵） →显微注射→体内发育→新性状动物 * （1）用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 （2）用_______ ____截取目 的基因，使其产生 ___________ _。 （3）将切下的目的基因片段插入质粒的______ 处，再加入适量___________，形成了一个重 组DNA分子（重组质粒）。 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA连接酶 1.过程: 二、基因表达载体的构建 质粒 目的基因 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 表达载体 同一种 2.基因表达载体的组成： 目的基因+启动子+终止子+标记基因+复制原点 它们有什么作用？ 启动子： 位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，启动转录产生mRNA 终止子 ： 位于基因的尾端。终止转录 标记基因： 检测受体细胞是否含有目的基因 3、基因表达载体的作用 a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用 ①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 注意 三、将目的基因导入受体细胞 1.转化 2.常用的受体细胞 3.将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。 受体细胞 常用方法 微生物基因工程 动物基因工程 植物基因工程 比较目的基因导入不同细胞的方法 农杆菌转化法 显微注射法 Ca2+处理法 体细胞 受精卵 原核细胞 三、将目的基因导入受体细胞 4.方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞吸收DNA分子 检测— 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交（注意与上不同之处） 抗原抗体杂交 四、目的基因的检测与鉴定 农杆菌转化法 农杆菌转化法 显微注射技术 *