丹参酮ⅱa对pd模型小鼠da能神经元的保护作用及其机制-人体解剖与组织胚胎学专业论文.pdf.docxVIP

ProtectiveEffectsofTanshinoneⅡAonDopaminergicNeuronsinMouseModelofParkinson’sDiseaseandRelatedMechanismsDissertationSubmittedtoHebeiUnitedUniversityinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyRenBo(Humananatomy)Supervisor:ProfessorZhangYu-xinJune, 2014独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北联合大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解河北联合大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□ 自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的研究丹参酮ⅡA对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahy-dropyridine,MPTP）所致帕金森病（Parkinson’sdisease,PD）模型小鼠黑质中酪氨酸羟化酶（Tyrosinehydroxylase,TH）、CD11b、p47-phox、诱导型一氧化氮合酶（InducibleNitricOxideSynthase,iNOS）表达的影响，以探讨丹参酮ⅡA对多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。方法健康雄性C57BL/6N小鼠120只，随机分为6组，每组20只。（1）模型3d组：腹腔注射MPTP（20mg/kg，生理盐水溶解），1次/2h，连续4次，于最后一次注射MPTP后12h注射5mg/ml的二甲基亚砜（Dimethylsulfoxide,DMSO），每天一次，连续3天，最后一次注射MPTP后3天取材；（2）模型7d组：腹腔注射MPTP（20mg/kg，生理盐水溶解），1次/2h，连续4次，于最后一次注射MPTP后12h 注射5mg/ml的DMSO，每天一次，连续7天，最后一次注射MPTP后7天取材；（3）丹参酮ⅡA干预3d组：除给予模型3d组相同的MPTP处理外，最后一次注射MPTP后12h给予丹参酮ⅡA（25mg/kg体重量，溶于5mg/ml的DMSO，腹腔注射），每天一次，连续3天，最后一次注射MPTP后第3天取材；（4）丹参酮ⅡA干预7d组：除给予模型7d组相同的MPTP处理外，最后一次注射MPTP后12h给予丹参酮ⅡA（25mg/kg体重量，溶于5mg/ml的DMSO，腹腔注射），每天一次，连续7天，最后一次注射MPTP后第7天取材；（5）对照3d组：腹腔注射与模型组和干预组等量的生理盐水，1次/2h，连续4次，最后一次注射生理盐水后12h注射与模型组和干预组等量的DMSO，每天一次，连续3天，于最后一次注射生理盐水后3天取材；（6）对照7d组：腹腔注射与模型组和干预组等量的生理盐水，1次/2h，连续4次，最后一次注射生理盐水后12h注射与模型组和干预组等量的DMSO，每天一次，连续7天，于最后一次注射生理盐水后7天取材。采用免疫组织化学法观察各组小鼠黑质区酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元数量，纹状体TH阳性神经纤维密度，黑质区CD11b、p47-phox、iNOS免疫反应阳性细胞数量变化，采用免疫蛋白印迹法检测中脑黑质区TH、CD11b、p47-phox、iNOS表达水平的变化。采用计算机图像分析法对免疫组化染色阳性细胞数量和蛋白印迹特异性蛋白条带进行半定量分析。所有数据采用SPSS13.0 统计分析软件进行统计学处理。结果与对照组小鼠相比，模型组小鼠出现典型PD症状，在MPTP最后一次注射-I-河北联合大学硕士学位论文后3d，黑质区CD11b（12.33±1.00 vs 3.11±0.78）、p47-phox（101.45±48.12 vs30.40±6.06）、iNOS（88.17±27.45 vs 47.46±4.60）阳性细胞显著增加（P＜0.05），蛋白水平亦随之升高；在MPTP最后一次注射后7d黑质区TH阳性神经元显著丢失50%