实验一 糖的呈色反.pptVIP

生 物 化 学 实 验 张蕾 杨明园 陈颖卓 考 核 方 式 实验报告情况（50%） 实验操作情况（20%） 开放实验（10%） 理论考试（10%） 实验素质（10%） 预习情况 原始数据 实验结果 结果讨论 不及格(60分) 有下列情况者，实验项目成绩评为不及格： 1．不能完成基本的实验操作； 2．实验报告马虎、内容不全、无数据处理过程或数据处理过程不完整、实验无结论等； 3．抄袭实验报告； 4．未做实验，但模仿指导教师笔迹签字伪造原始数据的; 5. 无故缺席或者迟到30分钟以上者，不能补做，该次实验成绩按0分记。 实验报告的书写格式 （1）实验目的（预习） （2）实验原理（预习） （3）药品试剂 （4）实验方法和步骤 （5）实验结果：包括原始数据的记录和结果计算等。 原始数据记录在实验报告空格处，每次实验的原始数据均需要老师签字。 ?重点! （6）讨论：包括对实验结果的分析和讨论；与同班其他组之间数据的差异以及产生的原因；与实际数据之间的差异和产生的原因；实验过程中的重要注意事项等等。?重点! 实验一 糖的呈色反应和定性鉴定 目的要求 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖； 了解鉴定还原糖的方法及其原理 糖相关知识 单糖中的果糖是酮糖，而葡萄糖是醛糖。 所有的单糖都是还原糖； 还原性的二糖有乳糖和麦芽糖，蔗糖是非还原性二糖。 糖的呈色反应和定性鉴定 Ⅰ. Molish反应——α-萘酚反应 Ⅱ. 蒽酮反应 Ⅲ. 酮糖的Seliwanoff反应 Ⅳ. Fehling试验 Ⅴ. Benedict试验 Ⅵ. Barfoed试验 I、Molish反应——α-萘酚反应 实验原理: 糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。 紫红色复合物 Molish反应注意事项 1、α- 萘酚可用麝香草酚或苯酚化合物代替。 2、单糖、双糖、多糖一般都发生此反应，但氨基糖不发生此反应。丙酮、各种醛糖衍生物、甘油醛等均产生近似的颜色反应。 3、Molish反应非常灵敏，0.001％葡萄糖和0.0001％蔗糖即能呈现阳性反应。因此，不可在样品中混入纸屑等杂物。 4、当果糖浓度过高时，由于浓硫酸对它的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈紫色，需稀释后再做。 Molish反应操作方法 试管编号后分别加入各待测糖溶液1 ml 然后加两滴Molish试剂，摇匀。 倾斜试管，沿管壁小心加入1ml浓硫酸，切勿摇动！ 小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色。 （用水代替糖溶液，重复一遍，观察结果） II、蒽 酮 反 应 实验原理: 糖经浓酸作用后生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（10-酮-9，10-二氢蒽）作用生成蓝绿色复合物。该复合物在630nm有最大的吸收峰，并且在一定范围内，颜色与糖量的多少成正比，该方法可以用于测定几乎所有碳水化合物的含量，包括戊糖、己糖，多糖等。 蒽酮反应的注意事项 在测定水溶性碳水化合物含量时切勿将未溶解的沉淀部分混入试剂中，否则会将细胞壁中的纤维和半纤维素混入样品，造成所测定值的升高。 不同的糖类与蒽酮试剂反应后的颜色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖和甘露糖较浅，五碳糖更浅，故在测定混合糖的含量时会应为混合物中不同糖的比例不同造成误差。在测定单一糖类的时候可避免此类的误差。 蒽酮反应操作方法 取试管，编号，均加入1ml蒽酮溶液 再向各管滴加2-3滴（100-150μl）待测糖溶液， 充分混匀，观察各管颜色变化并记录。 III、酮糖的Seliwanoff反应（西列瓦诺夫反应） 实验原理： 酮糖在酸的作用下较醛糖更易生成羟甲基糠醛。后者与间苯二酚作用生成鲜红色复合物，反应仅需20-30秒。醛糖在浓度较高时或长时间煮沸，才产生微弱的阳性反应。 Seliwanoff反应的注意事项 该反应是鉴定酮糖的特殊反应。 果糖与Seliwanoff试剂反应非常迅速，呈鲜红色，而葡萄糖所需时间较长，且只能产生黄色至淡黄色。戊糖亦与Seliwanoff试剂反应，戊糖经酸脱水生成糠醛，与间苯二酚缩合，生成绿色至蓝色产物。 Seliwanoff反应的操作方法 取试管，编号，各加入Sediwanoff试剂1ml 依次分别加入待测糖溶液各4滴，混匀， 放入沸水浴中，比较各管颜色的变化过程。 IV、Fehling试验 实验原理: 费林试剂是含有硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。硫酸铜与碱溶液混合加热，则生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。由于沉淀的速度不同，而形成的颗粒大小也不同，颗粒大的为红色，颗粒小的为黄色。 2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2