典型淡水养殖池塘厌氧氨氧化细菌的菌群结构、多样性和定量研究-渔业专业论文.pdf.docxVIP

典型淡水养殖池塘厌氧氨氧化细菌的菌群结构、多样性和定量研究 摘要随着养殖业的迅猛发展，养殖规模不断扩大，养殖物种不断增多，高密度集 约化养殖方式得到大面积推广使用。其密度高、周期短、封闭等特点通过影响养 殖水体中氨氮的含量，从而给养殖水体带来营养负担并污染整个养殖环境。厌氧 氨氧化作用是在厌氧条件下使有毒的氨与亚硝酸盐直接反应生成无毒的氮气的 过程，可以有效的解除养殖水体的氨毒。课题选用 hzo 基因作为功能性标记基因， 对青岛城阳养殖场夏季和冬季不同养殖品种鱼类和虾类养殖池塘沉积物环境中 厌氧氨氧化细菌的菌群结构、多样性和丰度进行研究，并结合环境因子测定，分析 hzo 基因丰度与环境因子的相关性关系，以期了解该养殖区的厌氧氨氧化细菌。 课题选择夏季和冬季沉积物共 12 个站位，分别构建 hzo 基因克隆文库，共筛选 得到 1210 个克隆，在 99%相似度水平上划分得到 39 个 OTUs，表明养殖区沉积 物环境中厌氧氨氧化细菌的多样性不高。获得的 hzo 基因序列与 NCBI 数据库中 序列相似度在 87%以上，相似度最高序列环境主要为东江沉积物和东江水柱以及 香港麦坡自然保护区沉积物环境。各站位百分覆盖率高和稀释曲线趋于饱和说明 所构建的基因文库能充分代表该环境厌氧氨氧化细菌 hzo 基因信息。多样性指数 F4 站位最高，S3 站位和 S4 站位最低，分析表明 F4 站位厌氧氨氧化功能物种丰 富度高。除 F2 站位外，养殖池各站位冬季沉积物多样性指数均高于相应的夏季 沉积物。各站位厌氧氨氧化菌群 Unifrac 聚类分析表明夏季养殖池各站位厌氧氨 氧化菌群结构差异相对较小，聚合在一起，冬季养殖池除 F2 站位外能很好的聚 合在一起，表现出了较明显的季节性特征。结合环境因子聚类分析结果，揭示养 殖区厌氧氨氧化菌群结构是沉积物间隙水和沉积物多种因子相互作用的结果。系 统发育树分为 4 个簇，系统发育分析表明养殖区厌氧氨氧化菌群主要归属于已鉴 定得到的 Candidatus Kuenenia、Candidatus Scalindua、Candidatus Jettenia 三个菌 属，各站位在每个分簇中相对集中，夏季河流水沉积物中多 Candidatus Kuenenia， 冬季河流水沉积物中多 Candidatus Jettenia，夏季沉淀池中多 Candidatus Jettenia， 冬季沉淀池中多 Candidatus Scalindua，夏季养殖池中多 Candidatus Scalindua，冬季养殖池中除 F2 站位外多 Candidatus Jettenia。养殖环境和季节等对环境中厌氧氨氧化细菌的菌群结构具有显著影响。养殖池沉积物厌氧氨氧化细菌 hzo 基因 拷贝数在 4.73×107copies/g 和 2.93×109copies/g 之间，丰度较高，但与环境因子之 间并没有表现出显著的相关性关系。关键词：淡水养殖，厌氧氨氧化细菌，hzo 基因Community structure, biodiversity and abundance of anaerobic ammonia-oxidizing bacteria in typical freshwater aquaculture pondsAbstractWith the rapid development of the aquaculture industry, the scale of farming is expanding, the aquaculture species is growing, and the high-density intensive farming method has got a large area promotion use. Its characteristics of high density, short cycles and closed environments brings to the aquaculture water nutrient burden and contaminate the whole breeding environment through influencing breeding ammonianitrogen content. Anaerobic ammonia oxidation （Anammox） can make toxicammonia and nitrate directly to harmless nitrogen, can effectively remove the ammonia of aquaculture water. To underst