东亚三角涡虫djpsa基因的鉴定、表达及功能分析-生物化学与分子生物学专业论文.pdf.docxVIP

llI山东理工大学硕士学位论文ABSTRACTnervecordsindistinctregenerativestagesaswell.Alsothispatternwasverifiedbyimmunofluorescence.SilencingexpressionofDjPsaby RNA interferenceindicatedthatDjPsaischangedsignificantlyinexpresionbyRT-PCR，andtheplanariansappeareddifferentialphenotypesduringregeneration.The写jPsagenecontaining restriction site was cloned into pET-28a(+) which was thentransformedintocompetentE.coliBL21(DE3).TheHis-taggedDjPSAfusionproteinexpressedinrecombinantE.coliBL21(DE3)was inducedbyIPTGindifferenttimes，concentrationsandtemperatures.ThefusionproteinwasdetectedwithSDS.Theresultsindicatedthatthe句PsageneexpressedasinclusionbodiesinE.coliBL21(DE3)，andwaspurifiedbyaffinitypurification，anditsmolecularweightwasestimatedtobeapproximately25kDa.Western blottingwithHis-tagantibodyshowedthattheantibodyreactedwiththeprotein.ThebacteriostasisexperimentrepresentedthattherenaturationDjPSAweremoreobvious bacteriostasis effects.These results pave the way for studying itsfunctions，activities，and may open the door to clarifying its mechanism ofbiologicalrole.Keywords:Dugesiajaponica;DjPsa;wholemountinsituhybridization;RNAi;prokaryoticexpression;刑Testernblotting目录摘要…………………………·……………………… JABSTRACT………·…………………11目录….v第一章文献综述……………………11.1涡虫-神经进化与发育的模式动物…11.2 氨肤酶研究进展21.2.1Psa基因的发现.31.2.2PSA的分子结构特征.41.2.3PSA蛋白的功能…………41.2.4DjPsa基因的研究意义………61.3本文研究的主要内容及技术路线71.3.1 生物信息学分析71.3.2涡虫巧hα基因核酸水平上的研究……71.3.3涡虫句Psα的生物学功能检测…….71.3.4功iPsa基因的研究技术路线………………………8第二章东亚三角涡虫DJPSA 基因的克隆及生物信息学分析92.1 前言92.2 材料和方法…92.2.1pcDNA3载体和DjPsa基因的连接….102.2.2 序列比对与系统进化分析112.3结果分析112.3.1pcDNA3载体和DjPsa基因的连接……..115.2.4重组His-PSA蛋白的抑菌实验设计………………，..375.3结果分析……385.3.1pET-28a(+)-DjPsa 原核表达载体的构建…….385.3.2 重组His-PSA蛋白的诱导表达与纯化.395.3.3重组His-PSA蛋白的抑菌检测…………0.……405.4讨论42总结与展望幻参考文献……钊致谢51附录…刃VI第一章文献综述1.1 涡虫.神经进化与发育的模式动物东亚三角涡虫(Dujesiajaponica)是扁形动物门、涡虫纲的代表动物。扁形动物是首次出现两侧对称、三胚层的类群。这种身体企的构造变化不仅促进了体内诸多器官的分化，增强了机体的新陈代谢，而且更有利于扁形动物对环境的适应[1]。涡虫(图1.1)多生活于清凉洁净的淡水溪流中，也有极少数种类生活在陆地的湿士中。涡虫对水质和水温较敏感，稍有污染可使其死亡，自天喜欢附着在水中石块或其它隐蔽的