高通量自动化药物筛查方案-生物通.pdfVIP

Gene Express 基因快讯2011年第2期 高通量自动化药物筛查方案 随着基因组学、化学合成技术及实验室自动化技术 EZ Reader系列药物筛选平台的核心是基于微流体芯 的发展，在制药与生物技术企业以及学术机构从事药物 片技术的迁移率检测技术 （Mobility-Shift Assay ），该技 筛选的科学家们需要面对开发大量新筛选实验的艰巨任 术将毛细管电泳的基本理念应用到微流体环境中，在不 务。这些实验必须是快速、经济、微量、灵敏、准确和 加入中止试剂的情况下检测酶学实验( 图二) 。用于实验的 自动化的。传统的药物筛选实验技术，比如亲近闪烁检 底物是带有荧光标记的多肽，在反应体系中酶的作用下 测法 （SPA ）、时间分辨荧光共振能量转移检测法 （TR- 底物转变为产物，其所带的电荷也发生了相应的变化， FRET ）、IMAP检测等，往往都是相当复杂的，而且需 Mobility -Shift A ssay 正是利用底物和产物所带电荷的不 要特殊的试剂，比如放射性试剂、特殊的抗体或其它的 同，将二者进行分离，并分别进行检测的。在微流体芯片 检测试剂。另外，酶活性的分析需要精确的测定底物的 中对样品进行分离的力量来源于两个不同的方面，电动力 Km和抑制剂的Ki ，这就需要测定酶促反应过程中产物生 学和液体压力。工作时，96或384孔板中的反应体系在负 成的速率。大多数药物筛选技术都局限于终点法检测， 压的作用下通过芯片底部的吸样针被吸入芯片内部的管 因而很难实现对整个酶促反应过程的跟踪与检测。为 路中。由于芯片中分离管路上被施加了电压，带有荧光 了突破传统药物筛选技术的种种局限，美国Caliper Life 标记的多肽底物和反应产物由于电荷的不同被分离，然 Sciences公司将微流体芯片技术 （Microfluidic Lab -on- 后在检测窗口进行信号的激发和检测。在检测每一个样 Chip ）应用于药物筛选领域，开发了不需要抗体和放射 品时，都可以同时看到底物和产物的信号。图三显示了 性试剂并具有实时动力学检测功能的EZ Reader系列药物 Mobility-Shift Assay技术的典型信号数据。产物的量通过 筛选平台 （图一）。 计算Conversion值，即产物峰的高度比上底物峰和产物峰 高度之和 （Product peak height/ （Substrate ＋Product peak height ）），来进行评估。在进行实时动力学检测时，仪 器会根据设定的时间间隔将样品吸入芯片中进行分析。 图一， EZ Reader药物筛选平台(A)与微流体芯片(B) 微流体芯片技术是将样品制备、生化反应和结果检 测等步骤集成到芯片上，将微型化、集成化、自动化的 特点集于一身，被视为未来生命科学及医药研究革新的 方向之一。微流体芯片是在微型化的芯片上蚀刻出微米 级直径的复杂管路系统。生物大分子进入这一管路系统 图三，Mobility-Shift Assay技术的典型信号数据 后，便在电场、压力、及温度的控制下，在这一管道系 EZ Reader系列药物筛选平台的应用覆盖了药物筛选 统中运动、混合并分离，进而在特定的检测窗口中被检 过程的多个方面，包括筛选实验开发、化合物筛选、效用 测，从而实现了多种功能，包括生物大分子的鉴定，生 机理研究 （M