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名校联盟吉林省东辽县第一高级中学高中生物人教版选修3《基因工程的基本操作程序》课件
* 基因工程的基本操作程序主要包括 四个基本步骤: 1)目的基因的获取 2)基因表达载体的构建 3)将目的基因导入受体细胞 4)目的基因的检测与鉴定 步骤一:目的基因的获取 目的基因是人们所需要转移或改造的基因, 获取目的基因是实施基因工程的第一步 。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因,还有植物的抗病(抗病毒、抗细菌)基因、种子贮藏蛋白的基因,以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 1.从基因文库中获取目的基因: 基因文库: 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库 基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库. 部分基因文库: 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库. 2.PCR技术 原理: 前提: 原料: 优点 过程: PCR扩增仪 DNA复制 已知目的基因的一段核苷酸序列 :以_____方式扩增, 在短时间内大量扩增目的基因 指数 模板DNA;DNA引物;四种脱氧核苷酸;热稳定DNA聚合酶(Taq酶);离子 变性 复性 延伸 1)反转录法: 以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获得所需的基因。 目的基因的mRNA 单链DNA(cDNA) 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 3.人工合成基因法 2)根据已知的氨基酸序列合成DNA法 : 根据已知蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的信使RNA序列,然后按照碱基互补配对原则,推测出它的结构基因的核苷酸序列,再通过化学方法,以单核苷酸为原料合成目的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 基因表达载体的组成: 目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用。 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因等 步骤二:基因表达载体的构建(基因工程的核心) 启动子:位于基因的首端的一段特殊的DNA片断,它是RNA聚合酶识别和结合的部位,有了它才能驱动基因转录出mRNA,最终获得蛋白质 终止子:位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断,能终止mRNA的转录 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将有目的基因的细胞筛选出来 1)用一定的限制酶切割质粒,使其出现一个切口,露出黏性末端。 2)用同一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端。 3)将切下的目的基因片段插入质粒的切口处,再加入适量DNA连接酶,形成了一个重组DNA分子(重组质粒) 目的基因与运载体的结合过程,实际上是不同来源的基因重组的过程。 构建步骤: 常用的受体细胞: 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 步骤三:目的基因导入受体细胞 三、将目的基因导入受体细胞 (一)转化: (二)方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内,并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 1.将目的基因导入植物细胞 3.将目的基因导入微生物细胞 首先用Ca2+ 处理细胞,以增大细菌细胞壁的通透性,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为感受态细胞. 第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程. 第二步目的基因在受体细胞内,随其繁殖而复制,由于细菌繁殖的速度非常快,在很短的时间内就能获得大量的目的基因。 (一)、检测 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 (关键步骤) ①.首先取出转基因生物的基因组DNA ②.用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针 ③.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中 (1)方法: DNA分子杂交 (2)过程: 归纳步骤 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段,将两种生物的DNA分子的单链放在一起,如果这两个单链具有互补的碱基序列,那么,互补的碱基序列就会结合在一起,形成杂合双链区;在没有互补碱基序列的部位,仍然是两条游离的单链。
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