基因工程的操作一轮复习课件.ppt

基因工程的操作 1、掌握基因操作的工具 2、掌握基因操作的基本步骤 3、了解获取目的基因的方法，掌握PCR技术与细胞内DNA分子复制的异同 4、掌握基因操作的工具在构建基因表达载体过程中的重要意义 5、掌握农杆菌转化法的过程，了解其它转基因的方法 6、掌握目的基因检测的方法 复习目标 基因工程的操作步骤 目的基因的检测与鉴定 获取目的基因 构建基因表达载体 将目的基因导入受体细胞 第一步：获取目的基因 获取目的基因的 方法 从基因文库中获取目的基因 基因文库包括___________和_________ 基因组文库 cDNA文库 利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术所需要的条件 人工合成目的基因 条件是： 基因比较小，且核苷酸序列已知 模板 原料 能量 酶 引物 关于PCR技术中的原料和能量 问题：PCR技术也是合成DNA分子的过程，属于合成反应，是消耗能量的，但图1—8中未提到能量。 图1—8分析：PCR的原料是dCTP、dGTP、dATP、dTTP。这四种物质并不是必修二中我们熟悉的四种游离的脱氧核苷酸，而是脱氧核苷酸连接上了两个磷酸，和ATP一样，是高能化合物，在PCR过程中是可以提供能量的。 试题中，若指出原料是dCTP、dGTP、dATP、dTTP，则条件中不再另写能量，若原料是四种游离的脱氧核苷酸，则另外还需要ATP提供能量。 PCR技术和DNA分子复制比较 PCR DNA分子复制 模板 相同，均为DNA分子双链 原料 四种游离的脱氧核苷酸或dCTP、dGTP、dATP、dTTP 四种游离的脱氧核苷酸 解旋 过程 高温（90～95℃），不需要酶 常温，需要解旋酶 DNA 聚合酶 热稳定DNA聚合酶（Taq酶），最适温度（70～75℃） 普通DNA聚合酶，最适温度为常温 引物 需要 不需要 构建基因表达载体 基因表达载体的组成 包括__________、_______、 _______、_________。 构建基因 表达载体 的条件 目的基因 启动子 终止子 标记基因 目的基因 运载体 限制性内切酶 DNA连接酶 关于限制酶的问题 一般来说，不同的限制酶有不同的识别序列，有不同的切点位置，切出不同的黏性末端，但也有两种特殊情况： 1.不同的限制酶有不同的识别序列，但可以切出相同的黏性末端，如以下两种酶处理得到黏性末端均为AATT： 酶I 识别序列 GAATTC CTTAAG 酶II AAAATTTT TTTTAAAA 两种酶经常用于同一个基因工程中 限制酶的选择使用 例题：基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。根据下图示判断下列操作正确的是 A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割 B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割 C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割 限制酶的选择使用 变式训练1 抗四环素基因 EcoB BamHⅠ HinDⅢ BamHⅠ 应选择哪种限制酶？ HinDⅢ 限制酶的选择使用 变式训练2 抗四环素基因 EcoB HinDⅢ BamHⅠ 使用的限制酶 EcoB BamHⅠ HinDⅢ 含四环素的培养基上的生长情况 含青霉素的培养基上的生长情况 抗青霉素基因 × √ √ × √ √ 关于限制酶的问题 2.不同的限制酶有相同的识别序列，但可以切出不同的黏性末端，如： 酶I 识别序列 GGAATTCC CCTTAAGG 酶II GGAATTCC CCTTAAGG 黏性末端 GAATTC AATT 这两种酶不会在同一个基因工程中采用 将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入植物细胞 最常用的方法是______________，除此外还有____________和 _________。 农杆菌转化法 基因枪法 农杆菌转化法是将含目的基因的重组质粒先转入___________细胞，再转移至____________，最后经__________________技术培养成转基因植物。 花粉管通道法 农杆菌 受体细胞 植物组织培养 将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入动物细胞 最常用的方法是____________。 显微注射法 感受 受精卵 DNA 受体细胞一般选择____________。 将目的基因导入微生物细胞 一般选择原核细胞如大肠杆菌作受体细胞，原因是____________________________________________。 繁殖快，多为单细胞、遗传物质含量相对较少等 Ca2+ 转化过程中需要使用________处理大肠杆菌，使其转变成能吸收周围环境中________的_______态细胞。 目的基因的检测与鉴定 检测目的