牡丹花芽显微切片实验报告.docVIP

牡丹花芽石蜡切片实验报告 一、实验目的 1．通过做石蜡切片，掌握做石蜡切片技术。 2．学会高倍显微镜观察方法，包括显微镜的使用、测量、照相等。 3．观察牡丹花芽的显微结构，并学会对观察结果进行处理和分析。 二、实验材料 1．材料：牡丹花芽 2．药品： 二甲苯，石蜡，加拿大树胶，95%酒精，无水乙醇，番红溶液，固氯等。 3．用具： 小玻璃瓶，镊子，酒精灯，恒温箱，染色缸，硬纸张，量筒，摊片板，载玻片，盖玻片，显微镜等。 三、实验步骤 1．固定 固定的目的和作用有多方面：一、固定可以防止细胞自溶和腐败，在整个制片过程中保存细胞内的各细胞器完整；二、增强细胞对各种浓度渗透压的抵抗能力；三、可使细胞成分沉淀和凝固，因而产生不同的折射率，造成光学上的差异，使得原来看不清楚的一些结构清晰起来。四、有些固定剂可使细胞各部分容易染色。材料为实验之前已经固定好的，因此步骤省去。 2．脱水 因组织固定和水洗后含有大量水分，不能和石蜡包埋剂溶合，因此在制作石蜡切片时，必须脱水之后才能进行包埋，否则组织内只要有极少量的水分都会影响包埋剂的渗入。 老师将固定液里的牡丹花芽给我之后，我将其放入70%的酒精溶液中，70%的酒精是用95%的酒精35ml兑入12.5ml蒸馏水配制的。用同样的方法配制80%、90%的酒精若干，之后每隔半个小时依次将材料放入80%、90%、95%、100%的酒精中进行脱水，100%的酒精要放两次，然后要把材料放入50%酒精50%二甲苯的混合液中进行过渡，再用纯二甲苯浸泡两次，以便在之后的浸蜡步骤中使石蜡更好的进入组织。 从95%的酒精换100%的酒精时，要用吸水纸吸干多余液，以免水分进入后序的实验。 在此步中，时间较紧，我只用二甲苯浸泡了一次，并且牡丹花芽材料组织较大，这可能是之后我的材料浸蜡不完全的主要原因。 3．浸蜡 经过脱水和透明后要让石蜡进入组织使其变硬，同时可以使组织更好的包埋进石蜡里，以方便用切片机进行切片。 在浸有牡丹花芽组织的二甲苯中加入石蜡沫，直至不能融化为止，继续加一些石蜡，使石蜡：二甲苯=3：2。将浸有石蜡的组织放入37℃恒温箱中浸蜡5天，然后更换纯蜡一次，再浸泡一天。 在此步中，由于我实验失误，在浸蜡6天后没有更换纯蜡，这应该是组织浸蜡不完全的主要原因。 4．包埋 为了方便切片机进行切片，要将组织包埋进石蜡里，然后将包有组织的石蜡块固定在一个木块上。 首先将装有石蜡和二甲苯浸泡的组织的小玻璃瓶放入60℃恒温箱内，使二甲苯——石蜡混合物融化，然后将用硬纸叠成的纸盒里装满加热成液体的纯石蜡，用加温后的镊子将材料夹到石蜡液里，待石蜡部分凝固后轻轻提起纸盒放入事先准备好的冰水中，使其迅速凝固，经30min后，取出晾干。 5．切片 此步是为了将植物组织切成厚度10-25um的薄片，以便在显微镜下进行观察。 先要将石蜡块修成适合切割的小块，用薄刀片刃一层层切割，直至修成需要的形状，然后用烧热的刀片将木块平面上的蜡沫熔化，然后将修好的蜡块按在木块上。将木块固定在切片机上，调整好后，用切片机进行修整，使石蜡块切割面完全平整。 在这一步中，我的切片厚度为15um。在切割时要注意，每个切片不要停顿，连续切割可使刀口变热，使石蜡融化，切成的石蜡片连接成带状。切下的石蜡薄片用毛笔挑到深色纸上。 6．贴片 在洗净的载玻片上涂蛋白甘油粘片剂，用手指将蛋白甘油粘片剂涂抹均匀，在其上滴几滴蒸馏水，用镊子将石蜡带切成小段并移到载玻片上的水滴中。将摊片机调整到40℃左右，将载玻片放在摊片机上，石蜡会自动展平。过段时间水分蒸发干后，即可用于临时观察。 此步中注意，粘片剂不要涂太多，以免在脱色时脱不掉。蜡带的光面应向下贴在载玻片上。 7．染色 为了更好的观察植物组织，必须进行染色，使植物组织各部分着色后才会拍出高质量的照片。番红染液是水性溶液，与石蜡互不相溶，因此染色前首先进行脱蜡。 将若干载玻片放于玻片缸中，用二甲苯洗两次，再用50%二甲苯50%酒精的混合液进行清洗，然后每隔半小时依次用100%、100%、95%、80%进行浸水，最后用番红染液浸染，使组织染色。 浸染了一夜之后，第二天再依次用75%、80%、85%、90%、95%、100%、100%的酒精进行脱水，再用50%二甲苯50%酒精混合液进行过渡，之后用两次纯二甲苯进行透明。其中，当用95%的酒精进行脱水后，在载玻片上滴一滴固绿进行染色，以便更好的观察。 在这一步中，由于番红染液是70%的酒精溶液，因此不必用70%的酒精进行浸水。由于实验时间较紧，进行梯度脱蜡时，我每次时间间隔缩短为十几分钟，但对最终实验结果影响不大。在脱水时，操作要尽量快些，否则可能使染上的色洗掉。我的切片染色时时间把握较好，因此照片色彩较好。 8．封藏 为了切片永久保留，要用封藏剂进行封藏。 这一步中，我们用加拿大