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Chimera分析总结
得到chimera
筛选出长度20bp的reads:1206906个比对结果,reads数472695个。
(/ifs1/ST_MD/USER/caixiangxing/single_cell_Assembler/chimera/find_chimera/paper/ chimera.above20)
筛选掉没有组合的情况,剩下:385830个比对结果,reads数164943个。
组合满足的条件是:(1)有两段总长100%;(2)两段都20bp。
去掉多种组合的或是某一段比上多出的(认为这是有歧义的),只保留一对组合的:310994个比对结果,reads数155497条。
把这155497条当做最终的chimera。参考文章当中共找出495条有嵌合体的read,这些read对应我们这里的条件应该是“read有两段组成;两段占read总长100%;两段长度都大于20”,按照这样的条件我们数据中这类read的条数RNT是多少(不是比对结果数)?
参考文章中495个里面有20个是有歧义的,我们这里可以认为满足下面其中一个条件的read是有歧义的“一条read有多种组成方式;一条read的某一段能比上多出”,这样???read数RNA是多少?
剩下没有歧义的就是155497? 应该等于RNT-RNA
之前里头所有的个数条数,都是reads数,不是比对结果数,计数的时候有考虑到;现在两种都表示出来。
155497条是剩下的没有歧义的。
歧义的reads数有9449条,占存在组合的reads总数5.73%(文章中是4.0%,495条中有20条歧义的)。
Reads数总共,29M。chimera占0.534%。
二、分析chimera
将chimera分为有overlap(=2bp)128178条(82.43%)和overlap 2bp(包括无overlap的)27319条,两种情况。
以下是对overlap(=2bp)Chimera的分析:
有overlap(=2bp)的Chimera深度特点分析
将chimera分成三段,起始段,覆盖overlap段,结束段。
查看有overlap(=2bp)的chimera,覆盖overlap段kmer深度情况,与其余两段的kmer深度进行对比。
(/ifs1/ST_MD/USER/caixiangxing/single_cell_Assembler/chimera/find_chimera/paper/step7.chimera.depth.num2.1)
发现有很多overlap段kmer深度情况很小,其余两段深度很大。
分析有overlap(=2bp)的chimera深度品均值
(1)分成三段的情况
Overlap段平均值均小于另外两段品均值0.6倍的,50966个
Overlap段平均值均小于另外两段品均值0.7倍的,52153个
(2)若只分成两段(第一段或第三段为空为空)
overlap段深度平均值小于0.6倍另一段的品均值的,有1170个。
以上两种情况是显著的chimera情况
128178个去除以上两种还有74855个。不知有没有可能是重复序列,分辨不出是chimera,还是重复序列。
Chimera类型分析
四种类型chimera个数:
嵌合体类型Reads类型ABCDOverlap(=2bp)这个chimera的类型统计为什么要基于overlap =2 来统计呢?
50474191104111117483Overlap=1bp或无overlap58695527560610317A,C两种类型所占比例总的比例66.3%
Chimara Overlap长度分布
分布图只画0-20bp的吧,20bp以上基本没有看
峰值出现在overlap=5bp处。
这个会不会与MDA扩增有关。
overlap区域与两端区域的平均kemer深度的分布图
两端区域平均kmer深度分布
Overlap区域平均kmer深度分布
Overlap区域平均kmer深度很低的chimera很多。
overlap区域与两端区域的平均kemer深度的比值:
分布图:这个究竟是谁比谁?如果是overlap比两端,那我们的关心的重点不应该是0到1之间吗?增加一个图中只显示该区域,大于1部分可以只给一个总比例
累积分布图:
只看0-1之间
Overlap与两端区域平均深度比值,66.8%的chimera=1剩下的33.2%(你0-1的分布图出来后,cutoff根据图再确定),具体什么情况得调查一下,譬如这些read平均深度是多少?只是这些read的深度分布如何?有什么特征?
更有超过50%的比值是小于0.01的。
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