细菌的生化试验造.pptVIP

细菌的生化试验 （一）实验目的 （二）实验原理 （三）实验器材 （四）实验方法 （一）实验目的 1.了解几种常用的细菌生化试验方法。 2.了解这些生化试验的原理。 （二）实验原理 各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同。 细菌具有分解某些糖类的特定酶，可根据细菌分解利用糖能力的差异，表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。 是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。 本试验采取的方法是用微量发酵管，接种菌培养后观察培养基产生气泡的状态判断产气情况。 2.甲基红试验（M.R.） 肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基pH值下降至pH4.5以下。 有机酸的产生可由加入的甲基红指示剂变色进行检验，甲基红变色范围为pH4.2（红）— pH6.3（黄），细菌分解葡萄糖产酸，使甲基红指示剂变红，将培养液由原来的橘黄色变为红色，则M.R.（+）反应。 3.V.P.试验 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧气氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V.P.（+）反应。 4.吲哚试验 有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚(靛基质)。吲哚本身没有颜色，不能直接看见，但当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂时，该试剂与吲哚作用，形成红色的玫瑰吲哚。 尿素酶试验 原理：细菌分解尿素产生两分子氢，使培养基pH值升高，指示剂酚红显示出红色，即证明细菌产生尿素酶。 （三）实验器材 1.活材料：大肠杆菌（E.?coli）、沙门氏杆菌 2.培养基 糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖、蔗糖） 葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基 3.试剂?  甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂。 4?.?器材 接种环、酒精灯、恒温培养箱。 （四）实验方法 1.??标记?：取葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖发酵试管和M.R.、V.P.、吲哚培养液试管各一支，标记上所要接种的菌种。????? 2.?接种：以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，糖发酵管为半固体培养基，用穿刺接种法接种。 3.培养：置37℃恒温箱中培养，糖发酵管在培养24h后观察结果，M.R.和V.P.在培养48h后观察结果，吲哚在培养72h后观察结果。 与对照管比较，若糖发酵管保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能利用该种糖，记录用“－”表示；如呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“＋”表示。 培养基中有气泡为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸并产气，记录用“⊕”表示；没有气泡为阴性反应，记录用“－”表示。 M.R.试验结果观察 于M.R.培养液中，各加入2～3滴甲基红指示剂，注意沿管壁加入，仔细观察培养液上层，若培养液上层变成红色，即为阳性反应；若仍呈黄色，则为阴性反应，分别用“＋”或“－”表示。 V.P.试验结果观察 取V.P.试管，加入等量V.P.试剂，摇匀，以使空气中的氧溶入，静置于37℃恒温箱中保温15～30min后，若培养液呈红色，记录为V.P.试验阳性结果（用“＋”表示）； 若不呈红色，仍未为黄中带蓝色者记录为V.P.试验阴性结果（用“－”表示）。  吲哚试验结果观察 在培养液中加入乙醚1～2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入1ml吲哚试剂（加入吲哚试剂后切勿摇动试管，以防破坏乙醚层影响结果观察）。 如有吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚试验阳性反应，仍呈黄色为阴性反应，阳性用“＋”、阴性用“－”表示。 * * 1.??糖类发酵试验原理 吲哚（靛基质）试验 原理：细菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对位二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚。 ? 硫化氢试验 原理： 有些细菌能分解含硫氨基酸，产生硫化氢（H2S）,H2S会使培养基中的醋酸铅或氯化铁形成黑色的硫化铅或硫化铁。 淀粉水解试验 原理：细菌如产生淀粉酶可将淀粉分解为糖类，在培养基上滴加碘液，可在菌落周围出现透明区。 培养液试管→标记→接种→培养→观察→记录 4.??结果观察 糖发酵管结果观察 *