专题2课题1微生物的实验室培养43ppt.ppt

* 专题2　微生物的培养与应用 课题1　微生物的实验室培养 一、培养基 1.概念:人们按照微生物对_________的不同需求,配制出供其 _________的营养物质。 2.种类: 营养物质 生长繁殖 液体 琼脂 3.营养组成:各种培养基一般都含有___、_____(提供碳元素的 物质)、_____(提供氮元素的物质)和无机盐,此外还需要满足 微生物生长对___、特殊营养物质(如维生素、氨基酸和碱基等) 以及_____的要求。 水 碳源 氮源 pH 氧气 二、无菌技术 1.关键:防止_________的入侵。 外来杂菌 2.消毒和灭菌: ___ 不能 芽孢和孢子能否被消灭 物体内外所有的微生物 物体___________的部 分微生物 消灭微生物的数量 _____ 较为温和 理化因素的作用强度 灭菌 消毒 比较项目 表面或内部 强烈 能 _________、干热灭 菌、高压蒸汽灭菌 煮沸消毒法、_______ _____、化学药剂消毒法、紫外线消毒法 常用方法 接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等 操作空间、液体、双手 适用对象 灭菌 消毒 比较项目 巴氏消 毒法 灼烧灭菌 三、大肠杆菌的纯化培养 1.制备培养基: (1)最常用的细菌培养基:___________________。 牛肉膏蛋白胨培养基 (2)配制步骤: 配方 黏稠 称量纸 迅速 琼脂 琼脂糊底 烧杯破裂 高压蒸汽 干热 50℃ 酒精灯火焰 2.纯化大肠杆菌: (1)纯化培养方法:在牛肉膏蛋白胨培养基上纯化大肠杆菌,最 常用的方法有_________法和_____________法。 (2)纯化培养的原理:想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖 而来的肉眼可见的_____,即获得较纯的菌种。 平板划线 稀释涂布平板 菌落 (3)平板划线法:通过_______在琼脂固体培养基表面连续_____ 的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其具体 操作是: ①将_______放在火焰上灼烧,直到接种环烧红。 ②在火焰旁冷却_______,并打开棉塞。 ③将试管口通过_____。 ④将已冷却的接种环伸入菌液中,沾取一环菌液。 ⑤将试管口通过火焰,并塞上棉塞。 接种环 划线 接种环 接种环 火焰 ⑥左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速伸 入平板内,划三至五条_____线,盖上皿盖。注意不要划破培养 基。 ⑦灼烧_______,待其冷却后,从第一区域划线的末端开始往第 二区域内划线。重复以上操作,在三、四、五区域内划线。注 意不要将最后一区的划线与第一区相连。 ⑧将平板_____,放入培养箱中培养。 平行 接种环 倒置 (4)稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的梯度_____,然后将不 同稀释度的菌液分别_____到琼脂固体培养基的表面,进行培养。 其操作步骤是: ①系列稀释(梯度稀释)操作: 稀释 涂布 ②涂布平板操作: a.将涂布器浸在盛有_____的烧杯中。 b.取少量菌液(不超过0.1 mL),滴加到培养基_____。 c.将沾有少量_____的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷 却8 s～10 s。 d.用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培 养皿,使菌液分布均匀。 酒精 表面 酒精 四、菌种的保藏 -20℃ 4℃ 温度 _____培养基 _________培养基 培养基 类型 _____保存的菌种 _____使用的菌种 适用 对象 甘油管藏法 临时保藏法 频繁 长期 固体斜面 液体 菌种易被污染或 _________ 缺点 将培养的菌液与等体积 灭菌后的_____混合均 匀后放在冷冻箱内保存 菌落长成后放入冰箱中保存,以后每3～6个月将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上 方法 甘油管藏法 临时保藏法 甘油 产生变异 【思考辨析】 1.判断正误 (1)平板划线操作中,接种结束后灼烧接种环的目的是杀死接 种环上原有的微生物。( ) 【分析】接种结束后灼烧接种环的目的是及时杀死接种环上 残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。 (2)在稀释涂布平板法操作中吸管要在酒精灯火焰周围使用。 ( ) (3)平板划线时,在第一次划线后,每次划线都要从上一次划 线的末端开始。( ) × √ √ (4)消毒和灭菌实质上是相同的。( ) 【分析】消毒使用较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内 部的部分微生物,不包括芽孢和孢子;灭菌使用强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。 × 2.问题思考 (1)在配制培养基时,各组分溶化以后是否立即进行灭菌?为什么? 提示：不是。由于不同的微生物生长对pH的需求不同,所以在培养基