人教版高中生物选修一5.3《血红蛋白的提取和分离》优教课件共32张PPT.ppt

1、 凝胶色谱柱的制作 打孔→挖穴→安管→覆网→纱包→插管 2、凝胶色谱柱的装填 固定色谱柱→配凝胶悬液→装填色谱柱→洗涤平衡 3、样品的加入和洗脱 调节缓冲液面→滴加透析样品→样品渗入凝胶床→洗脱→收集分装蛋白质 （二）凝胶色谱操作 样品的加入和洗脱 1.调液面 2.加样 3.再调液面 4.洗脱 5.收集 缓冲液 凝胶 1.红细胞的洗涤： 洗涤次数不能过少；低速、短时离心。 2.色谱柱的装填： 装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液 不能断流。 3.凝胶的预处理： 沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡 4.色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。 注意事项 　　在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？ 　　使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究。 思考 如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。 　　你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？ 思考 结果分析评价 3 　　观察你处理的血液样品离心后是否分层？若分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白提取纯度。 　　1. 你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？ 　　2. 你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？ 　　由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。若色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 　　若凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。 　　3. 你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？ 血红蛋白的提取和分离 蛋白质分子的差异性 凝胶色谱法 原 理 分离过程 凝胶电泳法 缓冲溶液 组 成 作 用 蛋白质的 提取分离 样品处理 粗 分 离 纯 化 纯度鉴定 1、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于（ ） A.电荷的多少 B.分子的大小 C.肽链的多少 D.分子形状的差异 B 2、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是（ ） A.弄清各种蛋白质的空间结构 B.弄清各种蛋白质的功能 C.弄清各种蛋白质的合成过程 D.获得高纯度的蛋白质 D 3、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是（ ） A.相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质 B.相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质 C.相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质 D.二者根本无法比较 A 4、下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（ ） A．可采集猪血作为实验材料 B．用蒸馏水重复洗涤红细胞 C．血红蛋白释放后应低速短时间离心 D．洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液 A 退出 导入一 导入二 导入三 新课导入 学习目标 新知探究 课堂小结 随堂测试 课题3 血红蛋白的提取和分离 蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化合物。对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。 1、分离生物大分子的基本思路是什么？ 选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 2、蛋白质的分离和提取的原理是什么？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 思考 1.通过进行探究实验，结合观看实验视频，能够尝试从血液中提取和分离血红蛋白 2.通过阅读资料，结合教师讲解，能够了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理 1 基础知识 1、概念：根据被分离物质（如蛋白质）相对分子质量的大小，利用具有多孔网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。 性质：微小的多孔球体 本质：多糖类化合物 实例：葡聚糖、琼脂糖 （一）凝胶色谱法 2、