新型基于普鲁兰多糖的药物基因共递送载体研究-生物化工专业论文.docx

硕士学位论文新型基于普鲁兰多糖的药物／基因 共递送载体研究A novel puUulan—based CO—carrier for drug and gene学号：2121 81 1 5大连理工大学Dalian University of Technology万方数据大连理工大学学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究 工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内容和致谢的地方外， 本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成果，也不包含其他已申请 学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献 均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。学位论文题目：作者签名：圣堕!兰日期：兰业年j月旦日万方数据大连理工大学硕士学位论文摘要以普鲁兰多糖为骨架，合成了一种新型药物／基因共递送载体，并对其包载药物和运 输外源基因的性能进行了研究。1．载体的合成和表征使用硬脂酸(SA)对普鲁兰多糖(Pullulan)进行疏水改性，再以琥珀酸酐为连接 臂将聚乙烯亚胺(PEI，1 kDa)接枝到多糖骨架上，合成了新型药物／基因共递送载体 PSP。1H NMR、FTIR及元素分析结果表明：成功合成了载体PSP。利用芘作为荧光探 针测得PSP的临界胶束浓度为58．9 I-tg／mL，选用透析法制备PSP纳米胶束，动态光散射测得PSP纳米胶束的粒径为188．75+3．18 nm，电位达17．83+0．75 mV，PSP纳米胶束在透射电子显微镜下呈规则的球形结构。缓冲能力分析表明：PSP纳米胶束具有良好的 介导外源基因进行核内体逃逸的性能。溶血实验显示：PSP纳米胶束毒性低，体现了较 好的生物相容性。2．PSP／DOX载药纳米胶束的性能研究选用模型药物阿霉素(DOX)，采用透析法制备PSP／DOX载药纳米胶束，随着药 载比的增加，载药量逐渐上升，包封率逐渐下降，在药载比为1：10时，载药量为 5．10-a：0．16％，包封率达56．07+1．80％。PSP／DOx载药纳米胶束可以缓慢释放DOX，且 药物释放行为呈现pH敏感性，一方面能够降低药物对正常组织的损害，另一方面有利于药物在偏酸性肿瘤部位的快速释放。使用流式细胞术研究MCF一7细胞对PSP／DOX的摄取情况和摄取机理，结果表明：PSP可有效携带药物进入癌细胞，MCF．7细胞对 PSP／DOX的摄取是由肌动蛋白聚合作用、网格蛋白共同介导的耗能的内吞作用。经 CLSM观察发现：PSP／DOX可被细胞有效内化。细胞毒性(MTT)结果显示：PSP／DOX 的抗癌效果略强于游离DOX。3．PSP／pDNA复合物的性能研究 不同N／P下PSP／pDNA复合物的粒径在84．16+6．36 nm到165．234-0．74 nm之间，复合物整体带正电，利于细胞内化和基因转染。电泳实验结果表明：载体PSP具备较强的 DNA结合能力，能够保护DNA免受核酸酶及血清中成分的降解。在体外转染测试中， 载体PSP可有效将报告基因转运进靶细胞，并得以表达，PSP／pDNA复合物在N／P为 10时转染效率最高。此外，MTT表明：载体PSP同样可将治疗基因p53有效运输至癌 细胞内，表达抑癌蛋白，杀死癌细胞：PSP／pDNA复合物的细胞毒性较低，低于Lipo2000／pDNA实验组，PSP／pDNA复合物作用红细胞1 h的溶血率为3．74+0．81％，同样条件下PEI 20 k／pDNA复合物的溶血率为38．21士0．50％，因此，PSP／pDNA复合物的生物万方数据新型基于普鲁兰多糖的药物／基因共递送载体研究相容性良好。4．PSP／DOX／p53的性能研究及体内实验 TEM结果显示：载体PSP在同时包载药物和吸附基因后仍为球形结构，粒径分布均匀。凝胶阻滞实验表明：包载DOX不会对载体的DNA结合能力产生不利影响。MTT 和Annexin V／PI染色结果显示：与单一的药物治疗或基因治疗相比，共递送体系具有更 好的治疗效果，体内实验表明：PSP／DOX／p53共传递体系不仅具有较好的抗肿瘤功效， 同时副作用较小。关键词：普鲁兰多糖；硬脂酸；聚乙烯亚胺；药物／基因载体；联合治疗万方数据大连理工大学硕士学位论文A novel pullulan··based CO·-carrier for drug and gene AbstractA novel pullulan derivative(PSP)was prepared as a targeted CO·delivery system of anti-cancer drug and therapeutic gene in cancer therapy．And the performance